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酶聯(lián)(上海)生物試劑科技有限公司

細胞或組織的具體方法

時間:2015-4-15閱讀:160
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    因此,還必須借助于組織化學(xué)方法將抗原抗體反應(yīng)部位顯示出來(常用顯色劑DAB顯示為棕黃色顆粒)。通過抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng),顯示細胞或組織中的化學(xué)成分,在顯微鏡下可清晰看見細胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物,從而能夠在原位確定某些化學(xué)成分的分布、含量。組織或細胞中凡是能作抗原或半抗原的物質(zhì),如蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、激素、核酸及病原體等都可用相應(yīng)的特異性抗體進行檢測。免疫組織化學(xué)染色方法

    1、按標記物質(zhì)的種類,如熒光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶)、鐵蛋白、膠體金等,可分為免疫熒光法、放射免疫法、酶標法和免疫金銀法等。

    2、按染色步驟可分為直接法(又稱一步法)和間接法(二步、三步或多步法);與直接法相比,間接法的靈敏度提高了許多。

    3、按結(jié)合方式可分為抗原—抗體結(jié)合,如過氧化物酶-抗過氧化物酶(PAP)法和親和連接,如卵白素-*-過氧化物酶復(fù)合物(ABC)法、鏈霉菌抗*蛋白-過氧化物酶連結(jié)(SP)法等,其中SP法是zui常用的方法??共《净钚詼y定法:檢測樣品中干擾素的含量zui常用的方法是檢測其抗病毒活性,其檢測原理是用細胞因子樣品處理易感細胞,使細胞建立抗病毒狀態(tài),然后用適量病毒攻擊細胞,評價病毒的復(fù)制量或病毒引起細胞病變的程度即可判斷樣品中細胞因子的生物活性。

    常用于檢測抗病毒活性的細胞株有WISH,Hep2/c,L929,A549和MDBK等。其中WISH和Hep2/c細胞株用以檢測人干擾素,L929細胞株用于檢測小鼠干擾素,Ratec細胞株用于檢測大鼠干擾素,而MDBK細胞株則可用于檢測多種族的IFN-α和IFN-γ。常用于攻擊細胞的病毒有濾泡性口炎病毒(VSV)、鼠腦心肌炎病毒(EMCV)以及Sindbis virus等病毒。

    檢測抗病毒活性包括測定細胞因子抑制病毒的致細胞病變效應(yīng)(CPE)、抑制病毒蝕斑形成或抑制病毒的產(chǎn)量等。 IFN的抗病毒活性通常以每毫升樣品中所含的單位數(shù)(U/ml)表達,IFN的純度則以每毫克蛋白質(zhì)中所含的單位數(shù)(U/mg)或IFN的量(μg/mg)表達。IFN抗病毒活性單位的定義是指能抑制50%細胞病變或50%病毒空斑形成效應(yīng)的IFNzui高稀釋度的倒數(shù)。

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