兔核轉錄因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍：
96T
20pg/ml-480pg/ml
使用目的：
本試劑盒用于測定兔血清、血漿及相關液體樣本中核轉錄因子-κB亞基  p65親和肽(NF-κB p65)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中兔核轉錄因子-κB亞基  p65親和肽(NF-κB  p65)水平。用純化的兔核轉錄因子-κB亞基  p65親和肽(NF-κB  p65)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入核轉錄因子-κB 亞基 p65 親和肽(NF-κB  p65)，再與HRP標記的核轉錄因子-κB亞基   p65親和肽(NF-κB  p65)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在   HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的核轉錄因子-κB亞基  p65親和肽(NF-κB  p65)呈正相關。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中兔核轉錄因子-κB亞基  p65親和肽(NF-κB  p65)濃度。
試劑盒組成
30倍濃縮洗滌液
20ml×1瓶
6ml×1瓶
12孔×8條
6ml×1瓶
6ml×1瓶
6ml×1/瓶
終止液
6ml×1瓶
2   酶標試劑
標準品（960pg/ml）     0.5ml×1瓶
3   酶標包被板
4   樣品稀釋液
5   顯色劑 A液
6   顯色劑 B液
標準品稀釋液
1.5ml×1瓶
1份
10   說明書
11   封板膜
12   密封袋
2張
1個
兔核轉錄因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)酶聯(lián)免疫分析試劑盒標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因   NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1.  標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
480pg/ml
240pg/ml
120pg/ml
60pg/ml
30pg/ml
5號標準品
4號標準品
3號標準品
2號標準品
1號標準品
150µl的原倍標準品加入  150µl標準品稀釋液
150µl的  5號標準品加入  150µl標準品稀釋液
150µl的  4號標準品加入  150µl標準品稀釋液
150µl的  3號標準品加入  150µl標準品稀釋液
150µl的  2號標準品加入  150µl標準品稀釋液
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水  30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此重復 5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。
溫育：操作同 3。
洗滌：操作同 5。
顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液    50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止液后 15分鐘以內進行。
操作程序總結：
以標準物的濃度為橫坐標， OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與  OD值計算出準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

兔核轉錄因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)酶聯(lián)免疫分析試劑盒注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5分鐘內，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本  OD值大于標準品孔*孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月