在動(dòng)物ELISA試劑盒中一般有3次加樣步聚，即加標(biāo)本，加酶結(jié)合物，加底物。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。
   加標(biāo)本一般用微量加樣器，按規(guī)定的量加入板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴，以發(fā)生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測(cè)定(如間接法ELISA)需用稀的血清，可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液，再在其加入血清標(biāo)本，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。

    加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物用液時(shí)可用定量多道加液器，使加液過(guò)程迅速完成。通過(guò)洗滌以清除殘留在板孔中沒(méi)能與固相抗原或，以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對(duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，而在洗滌時(shí)又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來(lái)?？梢哉f(shuō)在動(dòng)物ELISA試劑盒操作中，洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù)，應(yīng)引起操作者的高度重視，操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌，不得馬虎。
洗滌的方式除某些動(dòng)物ELISA試劑盒儀器配有特殊的自動(dòng)洗滌儀外，手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種，過(guò)程如下：
(1)浸泡式 a.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液;b.用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿板孔后，即甩去);c.浸泡，即將洗滌液注滿板孔，放置1-2分鐘，間歇搖動(dòng)，浸泡時(shí)間不可隨意縮短;d.吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)*，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;e.動(dòng)物ELISA試劑盒重復(fù)操作c和d，洗滌3-4次(或按說(shuō)明規(guī)定)。在間接法中如本底較高，可增加洗滌次數(shù)或延長(zhǎng)浸泡時(shí)間。