測(cè)定意義：
丙酮酸通過(guò)乙酰CoA 連接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代謝，起著重要的樞紐作用。
測(cè)定原理：
丙酮酸與2,4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，在堿性溶液中呈櫻紅色。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：液體50mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體5mL×1 瓶， 4℃保存；
試劑二：液體25mL×1 瓶， 4℃保存。
丙酮酸提?。?BR>1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量
（104 個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1 的比例（建議500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL 提
取液），超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30 次），靜置30min，
8000g，常溫離心10min，取上清待測(cè)。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織，
加入1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿，靜置30min，8000g，常溫離心10min，取上清待測(cè)。
3、血清（漿）樣品：按照血清（漿）體積（mL）：提取液體積(mL)為1：5~10 的比例（建
議取0.1mL 血清（漿）加入1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿，靜置30min， 8000g，常溫離心
10min，取上清待測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至520nm，蒸餾水調(diào)零。
2、取300μL 樣本+100μL 試劑一于1.5mL EP 管中，混勻，靜置2min，加入500μL 試劑二，
混勻，于520nm 波長(zhǎng)處測(cè)定管吸光值A(chǔ)。
丙酮酸含量計(jì)算：
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為y = 0.0466x + 0.0675； x 為丙酮酸鈉含量（μg/mL），y 為吸
光值。
2、按照血清（漿）體積計(jì)算
丙酮酸含量（μg/mL）= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷（V3×V1÷V2）=214.6×(A-0.0675)
3、按照蛋白濃度計(jì)算
丙酮酸含量（μg/mg prot）=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V1×Cpr)=21.46×(A-0.0675) ÷Cpr
4、按照樣品質(zhì)量計(jì)算
丙酮酸含量（μg/g 鮮重）= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(W ×V1÷V2）=21.46×(A-0.0675) ÷W
3、按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
丙酮酸含量（μg/104 cell）＝[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷（500×V1÷V2）=0.043×(A-0.0675)
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.3mL；V2：加入提取液體積，1 mL；V3：加入血清（漿）
體積，0.1 mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，
500 萬(wàn)。
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