土壤堿性磷酸酶測(cè)試盒: :
測(cè)定意義：
土壤磷酸酶是一類(lèi)催化土壤有機(jī)磷化合物礦化的酶，其活性的高低直接影響著土壤中有機(jī)磷
的分解轉(zhuǎn)化及其生物有效性，是評(píng)價(jià)土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向與強(qiáng)度的指標(biāo)。土壤磷酸酶受到
土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH 顯著影響，通常按照其zui適pH 范圍，分為堿性、中性
和酸性三種類(lèi)型磷酸酶。
測(cè)定原理：
堿性環(huán)境中，S-AKP/ALP 催化磷酸苯二鈉水解生成*和*，通過(guò)測(cè)定酚的生成
量即可計(jì)算出S-AKP/ALP 活性。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、37℃恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比
色皿、冰、蒸餾水、500ml 試劑瓶，96%乙醇和甲苯。
試劑組成和配制：
試劑一：液體，100ml×1 瓶，4℃避光保存；
試劑二：粉劑，1 支，用前加500ml 雙蒸水充分溶解，4℃保存；
試劑三：液體，5mL×1 瓶，4℃保存；
試劑四：粉劑，1 支，臨用前加96%乙醇1ml 充分溶解，4℃避光保存；
標(biāo)準(zhǔn)品：液體，1mL×1 支，0.05mg/ml 酚標(biāo)準(zhǔn)液。
粗酶液提取：
稱(chēng)取風(fēng)干土壤0.5g，加入0.25mL 甲苯，輕搖15min；加2ml 試劑一并且搖勻后，置于37℃
恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24h；培養(yǎng)完成后，加入10ml 試劑二充分混勻，10000rpm 室溫離心10min，
取上清置于冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟：
按下表操作：
充分混勻，顯色后加雙蒸水870μl，室溫靜置30min，用蒸餾水調(diào)零，于660nm 處檢測(cè)各
管的吸光值。注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管可以只做1 管。
S-ALP 活性計(jì)算：
S-AKP/ALP 活力單位定義：每克土壤每天釋放1mg 酚定義為一個(gè)活力單位。
S-AKP/ALP（U/g）=612.5×0.05×（OD 測(cè)定管-OD 空白管）÷OD 標(biāo)準(zhǔn)管÷0.5
=61.25×（OD 測(cè)定管-OD 空白管）÷OD 標(biāo)準(zhǔn)管
注意事項(xiàng)：
1、試劑一和試劑四均需避光保存；
2、試劑四變褐色后不能再使用；
3、加完雙蒸水室溫靜置30min 后，可用酶標(biāo)儀進(jìn)行測(cè)定；
4、為保證分母的統(tǒng)一性，土壤需風(fēng)干，但不能烘干，烘干會(huì)導(dǎo)致酶失活。
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