Il-8是一種分子量為8～10kD的多肽，對嗜中性粒細胞，T淋巴細胞、嗜鹼性粒細胞具有趨化作用，并可激活嗜中性粒細胞，是一種重要的炎癥介質。在嚴重感染病人的血清中、炎癥局部滲出液中都可檢測到高水平的IL-8。此外，近年來的研究表明，IL-8可能與各種組織缺血后再灌注損傷的發(fā)生有關。上海研晶生物技術有限公司的研究人員采用兩株自制的單克隆抗體建立了夾心法ELISA用于檢測IL-8，敏感性可達156Pg/ml。
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Il-8是一種分子量為8～10kD的多肽，對嗜中性粒細胞，T淋巴細胞、嗜鹼性粒細胞具有趨化作用，并可激活嗜中性粒細胞，是一種重要的炎癥介質。在嚴重感染病人的血清中、炎癥局部滲出液中都可檢測到高水平的IL-8。此外，近年來的研究表明，IL-8可能與各種組織缺血后再灌注損傷的發(fā)生有關。我們采用兩株自制的單克隆抗體建立了夾心法ELISA用于檢測IL-8，敏感性可達156Pg/ml，操作簡單，重復性良好，可用于IL-8的基礎和臨床研究。
一、原理：采用兩株識別不同表位的抗IL-8單克隆抗體，其中一株(4D7)作為包被抗體，以識別和結合待檢標本中的IL-8,另一株作為酶標抗體，與結合于包被抗體的IL-8的另一個表位結合并催化底物顯色。
二、試劑器材
1. 試劑盒提供包被抗體、酶標抗體、標準品，底物(ABTS)、96孔elisa板。
2. 包被緩沖液、PBS、底物緩沖液配制同常規(guī)ELISA法。
三、操作步驟：
1. 包被：pH9.5 碳酸鹽緩液稀釋4D7單克隆抗體粗提γ球蛋白至1μg/ml,加入96孔板,100μl/孔，放4℃,36小時。
2. 封閉：0.1%吐溫PBS(Buffer A)沖洗96孔板三次，加3%BSA Buffer A(Buffer B)200μl/孔，放37℃,1小時。
3. 加待檢樣品：Buffer A 沖洗96孔板三次，加待檢樣品及Buffer B 稀釋的標準品100μl/孔，放37℃,3小時。
4. 加酶標抗體：Buffer A沖洗96孔板五次,3%PEG Buffer A稀釋酶標抗體至1∶800，加入96孔板，100μl/孔，放37℃,1小時。
5. 顯色：Buffer A沖洗96孔板五次，pH5.4檸檬酸緩沖液溶解底物(ABTS),0.2mg/ml,加3%H2O2,2μl/ml，加入96孔板，100μ/孔，室溫下或37℃顯色。
四、注意事項：
1. 待檢標本如為血清，應采用一次性容器，血液采集后盡快(6小時以內(nèi))分離血清。
2. 封閉液或抗體稀釋液應新鮮配制或凍存。
