兔子腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)ELISA試劑盒
本試劑僅供研究使用
試驗原理：
iFABP試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知iFABP濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微
孔酶標(biāo)板內(nèi)進行檢測。先將iFABP和*標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)
過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深
淺和樣品中iFABP的活性濃度呈比例關(guān)系。
自備材料
1． 蒸餾水。
2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3． 振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
1． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2． 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
兔子腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)ELISA試劑盒操作注意事項
1． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
2． 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
3． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6． 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有
毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8． 加入試劑的順序應(yīng)*，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
9． 按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
兔子腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法
1、 血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離
心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使
用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)
在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
試劑的準(zhǔn)備
1． 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備，不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下
表中進行：
400ng/ml （6號標(biāo)準(zhǔn)品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
200ng/ml （5號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100ng/ml （4號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
50ng/ml （3號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
25ng/ml （2號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12.5ng/ml （1號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0ng/ml （空白對照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。
2． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。
兔子腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)ELISA試劑盒操作步驟
1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加
樣上的誤差。
2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣
品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3． 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的*標(biāo)記
的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
4． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用
洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用
洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8． 取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。
性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為
0.990。
2. 特異性：不與人其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
4.局限性：6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到精確的結(jié)果。
結(jié)果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的iFABP標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的
iFABP含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。
3、檢測值范圍：0-400ng/ml
4、敏感度： 1.0ng/ml
相關(guān)如下：
HZA953Hu中文名稱：人信號調(diào)節(jié)蛋白α(SIRPα)ELISA試劑盒英文名稱：for Signal Regulatory
Protein Alpha (SIRPa) 規(guī)格：48T/96T
HZA947Hu中文名稱：人信號調(diào)節(jié)蛋白γ(SIRPγ)ELISA試劑盒英文名稱：for Signal Regulatory
Protein Gamma (SIRPg) 規(guī)格：48T/96T
HZA561Hu中文名稱：人白血病抑制因子受體(LIFR)ELISA試劑盒英文名稱：for Leukemia Inhibitory
Factor Receptor (LIFR) 規(guī)格：48T/96T
HZG790Hu中文名稱：人Mdm2 p53結(jié)合蛋白同源物(MDM2)ELISA試劑盒英文名稱：for Mdm2 p53 Binding
Protein Homolog (MDM2) 規(guī)格：48T/96T
HZK111Hu中文名稱：人DNA修復(fù)蛋白RAD50(RAD50)ELISA試劑盒英文名稱：for DNA Repair Protein
RAD50 (RAD50) 規(guī)格：48T/96T
HZB405Hu中文名稱：人補體成分1q受體(C1qR1)ELISA試劑盒英文名稱：for Complement Component 1, Q
Receptor (C1qR1) 規(guī)格：48T/96T
HZG480Hu中文名稱：人毛透明蛋白(TCHH)ELISA試劑盒英文名稱：for Trichohyalin (TCHH) 規(guī)格：
48T/96T
AEK505Hu中文名稱：人抗肝素/血小板因子4抗體(Anti-HPF4)ELISA試劑盒英文名稱：for Anti-
Heparin/Plaet Factor 4 Antibodies (Anti-HPF4) 規(guī)格：48T/96T
HZB324Hu中文名稱：人鈣調(diào)結(jié)合蛋白(CALD)ELISA試劑盒英文名稱：for Caldesmon (CALD) 規(guī)格：
48T/96T
HZC223Hu中文名稱：人輔肌動蛋白α4(ACTN4)ELISA試劑盒英文名稱：for Actinin Alpha 4 (ACTN4) 規(guī)
格：48T/96T
HZG084Hu中文名稱：人嘌呤能受體P2Y14(P2RY14)ELISA試劑盒英文名稱：for Purinergic Receptor
P2Y, G Protein Coupled 14 (P2RY14) 規(guī)格：48T/96T
HZG120Hu中文名稱：人Synerginγ蛋白(SYNRγ)ELISA試劑盒英文名稱：for Synergin Gamma (SYNRg)
規(guī)格：48T/96T
HZG711Hu中文名稱：人G蛋白偶聯(lián)受體109B(GPR109B)ELISA試劑盒英文名稱：for G Protein Coupled
Receptor 109B (GPR109B) 規(guī)格：48T/96T
HZG766Hu中文名稱：人Crk樣蛋白(CRKL)ELISA試劑盒英文名稱：for Crk Like Protein (CRKL) 規(guī)格：
48T/96T
HZH463Hu中文名稱：人Palmdelphin蛋白(PALMD)ELISA試劑盒英文名稱：for Palmdelphin (PALMD) 規(guī)格
：48T/96T
HZJ245Hu中文名稱：人DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3A(DNMT3A)ELISA試劑盒英文名稱：for DNA Methyltransferase
3A (DNMT3A) 規(guī)格：48T/96T
HZR890Hu中文名稱：人PRMT5協(xié)同因子(COPR5)ELISA試劑盒英文名稱：for CoopeRator Of PRMT5
(COPR5) 規(guī)格：48T/96T
HZA348Hu中文名稱：人組織蛋白酶A(CTSA)ELISA試劑盒英文名稱：for Cathepsin A (CTSA) 規(guī)格：
48T/96T
HZA550Hu中文名稱：人巨噬細(xì)胞炎性蛋白5(MIP5)ELISA試劑盒英文名稱：for Macrophage Inflammatory
Protein 5 (MIP5) 規(guī)格：48T/96T
