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南京科捷檢測科技發(fā)展有限公司
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閱讀：3894發(fā)布時間：2018-6-29
你在液相色譜使用過程中是不是會遇到各種各樣的問題，別擔(dān)心，本文針對色譜圖的異常問題進(jìn)行了整理，并給出解決方法，供大家參考。
一個峰或幾個峰是負(fù)峰
解決方法：流動相吸收本底高；進(jìn)樣過程中進(jìn)入空氣；樣品組分的吸收低于流動相。
所有峰均為負(fù)峰
解決方法：信號電纜接反或檢測器輸出極性設(shè)置顛倒；光學(xué)裝置尚未達(dá)到平衡。
所有峰均為寬峰
解決方法：系統(tǒng)未達(dá)到平衡；溶解樣品的溶劑極性比流動相差很多；色譜柱尺寸及類型選擇不正確；色譜柱或保護(hù)柱被污染或柱效降低；溫度變化造成的影響。
所出峰比預(yù)想的小
解決方法：樣品黏度過大；進(jìn)樣品故障或進(jìn)樣體積誤差；檢測器設(shè)置不正確．定量環(huán)體積不正確；檢測池污染；檢測器燈出現(xiàn)問題。
保留時間變化
可能的原因:解決方法
1.柱溫變化:柱恒溫
2.等度與梯度間未能充分平衡:至少用10倍柱體積的流動相平衡柱
3.緩沖液容量不夠:用>25mmol/L的緩沖液
4.柱污染:每天沖洗柱
5.柱內(nèi)條件變化:穩(wěn)定進(jìn)樣條件,調(diào)節(jié)流動相
6.柱快達(dá)到壽命:采用保護(hù)柱
保留時間縮短
可能的原因:解決方法
1.流速增加:檢查泵,重新設(shè)定流速
2.樣品超載:降低樣品量
3.鍵合相流失:流動相PH值保持在3-7.5檢查柱的方向
4.流動相組成變化:防止流動相蒸發(fā)或沉淀
5.溫度增加:柱恒溫
保留時間延長
可能的原因:解決方法
1.流速下降:管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡
2.硅膠柱上活性點變化:用流動相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱
3.鍵合相流失:流動相PH值保持在3-7.5檢查柱的方向
4.流動相組成變化:防止流動相蒸發(fā)或沉淀
5.溫度降低:柱恒溫
肩峰
可能的原因:解決方法
1.樣品體積過大:用流動相配樣,總的樣品體積小于峰的15%
2.樣品溶劑過強(qiáng):采用較弱的樣品溶劑
3.柱塌陷或形成短路通道:更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件
4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效:更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品
5.進(jìn)樣器損壞:更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子
鬼峰
可能的原因:解決方法
1.進(jìn)樣閥殘余峰:每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥,改進(jìn)閥和樣品的清洗
2.樣品中未知物:處理樣品
3.柱未平衡:重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑(尤其是離子對色譜)
4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜):每天新配,用抗氧化劑
5.水污染(反相):通過變化平衡時間檢查水質(zhì)量，用HPLC級的水
基線噪聲
可能的原因:解決方法
1.氣泡(尖銳峰):流動相脫氣,加柱后背壓
2.污染(隨機(jī)噪聲):清洗柱,凈化樣品,用HPLC級試劑
3.檢測器燈連續(xù)噪聲:更換氘燈
4.電干擾(偶然噪聲):采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來源(如水浴等)
5.檢測器中有氣泡:流動相脫氣,加柱后背壓
峰拖尾
可能的原因:解決方法
1.柱超載:降低樣品量，增加柱直徑采用較高容量的固定相
2.峰干擾:清潔樣品，調(diào)整流動相，使用更長的色譜柱
3.硅羥基作用：加三乙胺，用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相PH值，鈍化樣品
4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效:更換燒結(jié)不銹鋼，加在線過濾器，過濾樣品
5.柱塌陷或形成短路通道:更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件
6.死體積或柱外體積過大:連接點降至低，對所有連接點作合適調(diào)整，盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管
7.柱效下降:用較低腐蝕條件，更換柱，采用保護(hù)柱，活化色譜柱
峰展寬
可能的原因:解決方法
1.進(jìn)樣體積過大:用流動相配樣，總的樣品體積小于峰的15%
2.在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展:進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散
3.數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢:設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點
4.檢測器時間常數(shù)過大:設(shè)定時間常數(shù)為感興趣峰半寬的10%
5.流動相粘度過高:增加柱溫,采用低粘度流動相
6.檢測池體積過大:用小體積池,卸下熱交換器
7.保留時間過長:等度洗脫時增加溶劑含量也可用梯度洗脫
8.柱外體積過大:將連接管徑和連接管長度降至小
9.樣品過載:進(jìn)小濃度小體積樣品
峰分叉
可能的原因：解決方法
1.保護(hù)柱或分析柱污染：取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析。如果必要更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞，拆下來清洗。如果問題仍然存在，可能是柱子被強(qiáng)保留物質(zhì)污染，運用適當(dāng)?shù)脑偕胧?。如果問題仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。
2.樣品溶劑不溶于流動相：改變樣品溶劑，如果可能采取流動相作為樣品溶劑。
基線漂移
可能的原因：解決方法
1、柱溫波動（即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動。通常影響示差檢測器、電導(dǎo)檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器）：控制好柱子和流動相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器
2、流動相不均勻（流動相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移）：使用HPLC級的溶劑，高純度的鹽和添加劑。流動相在使用前進(jìn)行脫氣，使用中使用氦氣。
3、流通池被污染或有氣體：用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用鹽酸）
4、檢測器出口阻塞（高壓造成流通池窗口破裂，產(chǎn)生噪音基線）：取出阻塞物或更換管子。參考檢測器手冊更換流通池窗。
5、流動相配比不當(dāng)或流速變化：更改配比或流速。為避免這個問題可定期檢查流動相組成及流速。
6、柱平衡慢：特別是流動相發(fā)生變化時，用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗，更改流動相時，在分析前用10-20倍體積的新流動相對柱子進(jìn)行沖洗。
7、流動相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成：檢查流動相的組成。使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級的溶劑。
8、樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個逐步升高的基線：使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。
9、使用循環(huán)溶劑，但檢測器未調(diào)整：重新設(shè)定基線。當(dāng)檢測器動力學(xué)范圍發(fā)生變化時，使用新的流動相。
10、檢測器沒有設(shè)定在大吸收波長處：將波長調(diào)整至大吸收波長處。
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