動(dòng)植物組織葡萄糖含量試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法 50 管/48 樣
測(cè)定意義：
葡萄糖不僅是細(xì)胞能量代謝的主要底物，而且其代謝中間產(chǎn)物是生物合成的重要底物。植物可通過(guò)光合作用產(chǎn)生葡萄糖。就哺乳動(dòng)物而言，葡萄糖不僅是大腦神經(jīng)系統(tǒng)、肌肉、脂肪組織等的*能源，而且與還原性輔酶、乳糖和乳脂的合成密切相關(guān)。
測(cè)定原理：
葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并產(chǎn)生過(guò)氧化氫；過(guò)氧化物酶催化過(guò)氧化氫氧化4-氨基*偶聯(lián)酚，生成有色化合物，在 505 nm 有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽和蒸餾水
試劑的組成和配制：
試劑一：0.5μmol/mL 葡萄糖溶液 10mL×1 瓶，4℃保存；試劑二：液體 25ml×1 瓶，4℃保存；試劑三：液體 25ml×1 瓶，4℃保存；
葡萄糖提?。?/span>
按照組織質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 蒸餾水），研磨成勻漿，置沸水浴中煮沸 10 分鐘（蓋緊，防止水分散失），冷卻后，8000g，常溫離心 10min，取上清液備用。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 505nm，蒸餾水調(diào)零。
2、混合試劑的配制：使用前將試劑二和試劑三 1:1 等體積混合，用多少配多少。
3、加樣表（在 EP 管中加入下列試劑）：
試劑（μL） | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測(cè)定管 |
| | | |
樣本 | | | 100 |
| | | |
試劑一 | | 100 | |
| | | |
蒸餾水 | 100 | | |
| | | |
混合試劑 | 900 | 900 | 900 |
| | | |
混勻，置 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）水浴中，保溫 15min，于 505nm 波長(zhǎng)處讀取吸光度?？瞻坠?、標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管吸光值分別記為 A1、A2 和 A3?？瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)管只要做一管。
葡萄糖含量計(jì)算：
一、葡萄糖含量(µmol/mg prot)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr)=0.5×(A3-A1)÷ (A2-A1)÷Cpr。
二、葡萄糖含量（µmol/g 鮮重）= (C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=0.5×(A3-A1)÷
(A2-A1)÷W
C 標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.5µmol/mL；V1：加入樣本體積，0.1mL；V2：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。
注意：如果用計(jì)算方法一，需要另外測(cè)定蛋白濃度。
會(huì)員1.png)