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一、點板
加樣過程中的注意事項
加樣的過程中漏加或者重加;
加樣的過程中忘記更換吸頭;
樣本的重加或者漏加;
忘記記錄樣本的加樣順序
加樣應(yīng)用微量移液器(加樣*)按規(guī)定的量加入微孔板的1/3處避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。
在實際點樣過程中,提倡用“重復(fù)移液法",用這種方式,有如下幾種好處
加樣過程中在板空內(nèi)不出現(xiàn)或者很少出現(xiàn)氣泡
提高加樣速度,縮短前后樣本反應(yīng)的時間差
常見的洗板方式
洗板機洗板;
多道孔加樣器洗板
多孔吸頭洗板
在洗板的過程中,確保每孔所加洗滌液量的均一,按說明書操作,不可過多,避免溢出板孔,污染其它樣本,過少,則達不到洗滌的效果,容易出現(xiàn)曲線不成線性,花板等情況。
二、洗板:
洗板機洗板
洗板機洗板一定要預(yù)先把板架放平,使洗板機上的每個放液和吸液纖孔都能一致地插入孔底,將孔內(nèi)液體全部吸干,同時要設(shè)置一定的浸泡時間。如出現(xiàn)機洗后拍板有較多殘留液時應(yīng)再用手工洗2次以上。關(guān)機前要用蒸溜水沖洗管道,避免堵孔
手工洗滌
手工洗滌一般采用多道孔加樣器進行洗板,注意要*行吸頭的篩選,防止出現(xiàn)*頭安放不牢的現(xiàn)象。
ELISA是靠洗滌來達到分離結(jié)合與未結(jié)合抗原抗體復(fù)合物及酶標記物的目的,同時洗滌也可將非特異吸附的干擾物質(zhì)清除掉。
三、甩板
快速甩盡板孔內(nèi)的液體。防止板孔里的液體對流或反濺回板孔中產(chǎn)生交叉污染。
四、拍板
輕輕的在吸水紙上扣干板孔內(nèi)的液體,而且吸水紙只能使用一次
五、顯色
值得注意的是,并非試劑盒中所規(guī)定的顯色時間是的,因為試劑盒的吸光度值會受環(huán)境中的溫度、濕度、酶標板反應(yīng)時所接觸到的物品的導(dǎo)熱度等有關(guān),實驗操作人員在加完顯色液后,可根據(jù)顏色的深淺適當?shù)难娱L或者縮短顯色時間。防止出現(xiàn)吸光值接近或高于酶標儀的zui高檢測靈敏度(OD值在2.5-3.0之間),這樣會間接影響到檢測結(jié)果,如出現(xiàn)曲線前半部份梯度不明顯或顛倒數(shù)值等現(xiàn)象,也就造成了一些假陽性或部份檢測結(jié)果偏低的現(xiàn)象。
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