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ELISA實驗中的酶免疫測定

閱讀:361發(fā)布時間:2015-2-9

    酶免疫測定(enzyme immunoassay,EIA),是將酶催化作用的性與抗原抗體反應的特異性相結合的一種微量分析技術。酶標記抗原抗體后形成的酶標記物,既保留抗原或抗體的免疫活性,又保留酶的催化活性。當酶標記物與待測樣品中相應的抗原或抗體相互作用時,可形成酶標記抗原抗體復合物。利用復合物上標記的酶催化底物顯色,其顏色深淺與待測樣品中抗原或抗體的量相關。該方法靈敏度可達到ng~pg/ml水平。常用的標記物有辣根過氧化物酶HRP和堿性磷酸酶AP等。

    酶免疫測定分為酶聯免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和酶免疫組化技術(enzyme immunohistochemistry technique),前者用于測定可溶性抗原或抗體,后者用于測定組織或細胞表面的抗原。

    酶免疫測定(enzymeimmunoassay,EIA)是以酶作為標記物的免疫測定方法,利用酶的催化作用提高檢測的敏感度。根據抗原抗體反應后是否需要分離結合的與游離的酶標記物,酶免疫測定可分為均相(homogenous)和異相(heterogenous)兩種類型。

    相對于均相酶免疫測定技術,異相酶免疫測定在醫(yī)學檢驗應用更為廣泛,其反應過程中需經過結合標記物和游離標記物的分離才能進行測定。分離的方法主要借助固相載體,即將一種反應物固定在固相載體上,當另一種反應物與之結合后,可通過洗滌、離心等方法令其與液相中的其他物質分離,此類反應亦稱為固相酶免疫測定。所謂的免疫吸附劑指的是吸附在固相載體上的免疫活性物質ELISA在臨床及科研中應用極為廣泛,已成為固相酶免疫測定的代名詞。


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