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ELISA實(shí)驗(yàn)中的酶免疫測(cè)定

閱讀：378發(fā)布時(shí)間：2015-2-9

    酶免疫測(cè)定(enzyme immunoassay,EIA)，是將酶催化作用的性與抗原抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合的一種微量分析技術(shù)。酶標(biāo)記抗原抗體后形成的酶標(biāo)記物，既保留抗原或抗體的免疫活性，又保留酶的催化活性。當(dāng)酶標(biāo)記物與待測(cè)樣品中相應(yīng)的抗原或抗體相互作用時(shí)，可形成酶標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物。利用復(fù)合物上標(biāo)記的酶催化底物顯色，其顏色深淺與待測(cè)樣品中抗原或抗體的量相關(guān)。該方法靈敏度可達(dá)到ng~pg/ml水平。常用的標(biāo)記物有辣根過(guò)氧化物酶HRP和堿性磷酸酶AP等。

    酶免疫測(cè)定分為酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和酶免疫組化技術(shù)(enzyme immunohistochemistry technique)，前者用于測(cè)定可溶性抗原或抗體，后者用于測(cè)定組織或細(xì)胞表面的抗原。

    酶免疫測(cè)定(enzymeimmunoassay，EIA)是以酶作為標(biāo)記物的免疫測(cè)定方法，利用酶的催化作用提高檢測(cè)的敏感度。根據(jù)抗原抗體反應(yīng)后是否需要分離結(jié)合的與游離的酶標(biāo)記物，酶免疫測(cè)定可分為均相(homogenous)和異相(heterogenous)兩種類(lèi)型。

    相對(duì)于均相酶免疫測(cè)定技術(shù)，異相酶免疫測(cè)定在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)應(yīng)用更為廣泛，其反應(yīng)過(guò)程中需經(jīng)過(guò)結(jié)合標(biāo)記物和游離標(biāo)記物的分離才能進(jìn)行測(cè)定。分離的方法主要借助固相載體，即將一種反應(yīng)物固定在固相載體上，當(dāng)另一種反應(yīng)物與之結(jié)合后，可通過(guò)洗滌、離心等方法令其與液相中的其他物質(zhì)分離，此類(lèi)反應(yīng)亦稱(chēng)為固相酶免疫測(cè)定。所謂的免疫吸附劑指的是吸附在固相載體上的免疫活性物質(zhì)ELISA在臨床及科研中應(yīng)用極為廣泛，已成為固相酶免疫測(cè)定的代名詞。


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