ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)需根據(jù)自身需求選擇96孔板或是384孔板進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)。
現(xiàn)在查看ELISA有很多途徑，我們可以根據(jù)自個(gè)的偏好進(jìn)行選擇。一般ELISA查看的是酶促反應(yīng)的可溶性產(chǎn)品，抗體上聯(lián)絡(luò)有相應(yīng)的酶（例如一般運(yùn)用的辣根過氧化物酶HRP），而反應(yīng)體系中添加有相應(yīng)的底物（如3，3-二氨基聯(lián)苯胺DAB）。
ELISA試劑盒盡管有多種類型，不過它們都有一個(gè)一起特征，就是進(jìn)行抗原捕獲。
一般捕獲方法包括將抗原吸附到微孔板或許用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。
In-cell ELISA和酶聯(lián)免疫斑斕ELISPOT是兩種格外的類型，In-cell ELISA需求將微孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行固定和通透化，然后再用抗體原位查看。ELISPOT有點(diǎn)像蛋白印跡Western blot，先在帶膜的微孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，然后在膜上查看細(xì)胞分泌的抗原構(gòu)成斑斕。
這種酶促反應(yīng)生成具有特征性的顏色，可以經(jīng)過分光光度計(jì)進(jìn)行查看，堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。
ELISA試劑盒在用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA查看時(shí)，查看用的二抗有必要特異性關(guān)于查看一抗，而不能與捕獲抗體起反應(yīng)。
假設(shè)查看用二抗與捕獲抗體聯(lián)絡(luò)，實(shí)驗(yàn)特異性就會大打折扣。
一般我們選用源自不一樣宿主的捕獲抗體和查看一抗，來避免上述疑問。
酶可以聯(lián)絡(luò)在一抗上，也可以聯(lián)絡(luò)在二抗上，還可以運(yùn)用鏈霉親和素符號的酶與親和素符號的一抗聯(lián)絡(luò)。此外ELISA的效果查看還包括放射性查看、熒光查看、化學(xué)發(fā)光或顯色法查看等。
單克隆抗體和多克隆抗體都可以用于ELISA試劑盒，ELISA試劑盒實(shí)際上有時(shí)候二者聯(lián)絡(luò)效果非常好。例如，關(guān)于雙抗夾心法而言，用多抗進(jìn)行捕獲而單抗進(jìn)行查看有時(shí)更有協(xié)助。
多抗可以保證捕獲全部抗原，隨后單抗再特異性查看具有特定抗原表位的抗原。
假設(shè)抗體間發(fā)生抵觸或交叉反應(yīng)就會影響全部實(shí)驗(yàn)的特異性。
ELISA試劑盒其間抗體來歷所帶來的兼容性就是交叉反應(yīng)的一個(gè)要素。盡管現(xiàn)在收購源自動(dòng)物的抗體越來越簡略，我們?nèi)杂斜匾姓J(rèn)一下是不是會發(fā)生交叉反應(yīng)的疑問。
會員1.png)