脂肪酸代謝系列_CoA羧化酶ACC測試盒_微量法
測定方法：微量法
產品規(guī)格：100管/48樣
注 意 ：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
ACC在生物體內催化乙酰CoA羧化生成丙二酰CoA，是脂肪酸和許多次生代謝產物合成的關鍵酶。ACC的活性在一定程度上決定了脂肪酸的合成速度和含油量的高低。
測定原理：
ACC能夠催化乙酰CoA、NaHCO3和ATP生成丙二酰CoA、ATP和無機磷，通過鉬酸銨定磷法測定無機磷的增加量來測定ACC活性。
需自備的儀器和用品：
分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成：
提取液：100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：10mL×1瓶， 4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存；
試劑四：粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時加入25mL蒸餾水，溶解后4℃可保存一周。
試劑五：粉劑×1瓶, 4℃保存。用時加入25mL蒸餾水，溶解后4℃可保存一周。
試劑六：液體 25mL×1 瓶，室溫保存。
試劑七：10μmol/mL 標準磷貯備液 10mL×1 瓶，4℃保存。
脂肪酸代謝系列_CoA羧化酶ACC測試盒_微量法
樣本的前處理：
1、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至660nm，蒸餾水調零。
2、酶促反應試劑的配制和預熱：在試劑二瓶中加入2.5mL試劑一，充分溶解混勻；在試劑三瓶中加入2mL蒸餾水，充分溶解混勻；將試劑一、二、三在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預熱10分鐘。
3、定磷試劑的配制：按H2O: 試劑四:試劑五:試劑六=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷試劑
應為淺，若無色則試劑失效，若是藍色則為磷污染，定磷劑現用現配。
環(huán)保在線