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ELISA劑盒標本及收集、貯運要素
① 嚴峻溶血:以HRP為符號的ELISA測定中,殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過氧化物酶樣活性,催化底物顯色形成假陽性;
② 混有紅細胞的血清易沉積或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈
③ 如有細菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會發(fā)生假陽性反應;
④ 標本凝結(jié)不全,有時為了爭取時刻快速檢測,常在血液還未開始凝結(jié)時即強行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中能夠構(gòu)成肉眼可見的纖維蛋白塊,易形成假陽性成果;
⑤ 采血試管洗滌不*、重復使用易穿插污染
⑥ 塑料試管能吸附抗原物質(zhì) ,樣本久置在塑料管內(nèi)會使樣本內(nèi)抗原含量下降形成假陰性。
血清標本宜在新鮮時檢測,嚴峻溶血標本禁用。一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標本可放置于4℃,標本在冰箱中保存時刻過長導致血清IgG 聚合,使間接法的 試劑 本底加深。超越一周測定的需-20℃保存。凍住血清融解后,蛋白質(zhì)部分濃縮,散布不均,應充沛混勻并避免發(fā)生氣泡?;鞚峄蛴谐练e的血清標本應先離心或過濾,弄清后再檢測。重復凍融會使 抗體 效價下跌,所以測 抗體 的血清標本如需保存作屢次檢測,宜少數(shù)分裝冰存。
ELISA劑盒之操作技能的影響
① 應確保清潔,整個操作過程中確保酶標板不觸摸次氯酸。以上的措施能夠使“花板”降限。然后進步檢測的特異性。并得到更、可靠的試驗成果。
② 合理安排檢測量,以免反應板過多形成洗板等候時刻長。
③ 加酶試劑后用吸水紙在酶標板外表輕拭吸干。
④ 用洗板機洗板時,確保洗液注滿各孔,洗板針疏通,洗完板后在吸水紙(挑選干凈、無或少塵的吸水資料)上輕輕拍干:還要防止針口有纖維蛋白或異物,這些異物在洗板的過程中易發(fā)生拖帶現(xiàn)象而導致“花板”的呈現(xiàn)。
⑤ 顯色劑盡量在臨用前制造,堅持不期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不必。
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