人乳頭瘤病毒L1(HPVL1)抗體ELISA試劑盒
自備物品
酶標(biāo)儀(450nm)
高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
37℃恒溫箱
人乳頭瘤病毒L1(HPVL1)抗體ELISA試劑盒
結(jié)合物的制備
酶標(biāo)記抗體的制備方法主要有兩種,即戊二醛交聯(lián)法和過碘酸鹽氧化法。
(1)戊二醛交聯(lián)法:戊二醛是一種雙功能團(tuán)試劑,它可以使酶與蛋白質(zhì)的氨基通過它而聯(lián)結(jié)。堿性磷酸一般用此法進(jìn)行標(biāo)記。交聯(lián)方法一步法、兩步法兩種。在一步法中戊二醛直接加入酶與抗體的混合物中,反應(yīng)后即得酶標(biāo)記抗體。
ELISA中常用的酶一般都用此法交聯(lián)。它具有操作簡便、有效(結(jié)合率達(dá)60%-70%)和重復(fù)性好等優(yōu)點。缺點是交聯(lián)反應(yīng)是隨機(jī)的,酶與抗體交聯(lián)時分子間的比例不嚴(yán)格,結(jié)合物的大小也不均一,酶與酶,抗體與抗體之間也有可能交聯(lián),影響效果。在兩步法中,先將酶與戊二醛作用,透析除去多余的戊二醛后,再與抗體作用而形成酶標(biāo)抗體。也可先將抗體與戊二醛作用,再與酶聯(lián)結(jié)。兩步法的產(chǎn)物中絕大部分的酶與蛋白質(zhì)是以1:1的比例結(jié)合的,較一步法的酶結(jié)合物更有助于本底的改善以提高敏感度,但其偶聯(lián)的有效率較一步法低。
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