圖(A) TBK1與OPTN, NAP1的結(jié)構(gòu)域組成圖。(B) 等溫量熱滴定法測(cè)定TBK1 CTD與OPTN(26-119)片段的相互作用。(C) OPTN與TBK1復(fù)合物結(jié)構(gòu)的卡通模式圖。(D) 等溫量熱滴定法測(cè)定TBK1 CTD與NAP1(215-254)片段的相互作用。(E) NAP1與TBK1復(fù)合物結(jié)構(gòu)的卡通模式圖。(F) OPTN野生型、OPTN E50K突變體與TBK1，以及OPTN野生型與TBK1 E696K突變體在HeLa細(xì)胞中的共定位分析。

細(xì)胞自噬是一種在真核細(xì)胞中高度受調(diào)控的、溶酶體依賴性的重要細(xì)胞代謝過程，主要參與降解細(xì)胞內(nèi)的大型蛋白聚集體、衰老損傷的細(xì)胞器以及侵入細(xì)胞的病原體等。它的功能異常與多種神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生密切相關(guān)。Optineurin(OPTN) 是一個(gè)多功能的自噬受體蛋白，在細(xì)胞選擇性自噬的底物識(shí)別環(huán)節(jié)發(fā)揮著重要的作用，被報(bào)道參與選擇性自噬降解細(xì)胞內(nèi)衰老損傷的線粒體、毒性的蛋白聚集體以及入侵細(xì)胞的病原體，它的基因突變導(dǎo)致的功能異常與諸多神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生密切相關(guān)，如原發(fā)性開角型青光眼(POAG)和肌側(cè)索硬化癥(ALS)。同時(shí)，近期的遺傳學(xué)研究表明：蛋白激酶TBK1的多種缺失體和點(diǎn)突變體與神經(jīng)退行性疾病ALS的發(fā)生有關(guān)，尤其是位于與OPTN相互作用的C末端區(qū)域的TBK1 E696K突變體和690-713缺失體。此外，在Parkin介導(dǎo)的降解線粒體的選擇性自噬(mitophagy)過程中，TBK1能夠與自噬受體蛋白OPTN相互作用，進(jìn)而磷酸化OPTN的LIR區(qū)域和UBAN結(jié)構(gòu)域，從而參與調(diào)控相關(guān)的選擇性細(xì)胞自噬過程。但是，迄今為止，關(guān)于OPTN蛋白與TBK1相互作用的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)以及與POAG和ALS疾病相關(guān)的基因突變的致病機(jī)制仍然未知。

近期，中國科學(xué)院上海有機(jī)化學(xué)研究所生命有機(jī)化學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室潘李鋒研究組在期刊《自然-通訊》（Nature Communications）發(fā)表了題為Structural insights into the interaction and disease mechanism of neurodegenerative disease-associated optineurin and TBK1 proteins 的研究論文。該團(tuán)隊(duì)首先運(yùn)用一系列的生化手段得到OPTN與TBK1發(fā)生相互作用的zui小結(jié)合片段，然后運(yùn)用X射線晶體衍射分析技術(shù)成功解析了OPTN與TBK1的復(fù)合物結(jié)構(gòu)以及相關(guān)的TBK1與NAP1的復(fù)合物結(jié)構(gòu)。這些解析的復(fù)合物結(jié)構(gòu)不僅闡述了蛋白激酶TBK1與OPTN和NAP1相互作用的分子機(jī)制，揭示了一種TBK1識(shí)別不同腳手架蛋白的通用結(jié)合模式，而且從結(jié)構(gòu)水平解釋了POAG相關(guān)的OPTN E50K突變體和與ALS相關(guān)聯(lián)的TBK1 E696K突變體的致病機(jī)制。此外，通過一系列的生物化學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：OPTN 的E50K突變不僅能增強(qiáng)與TBK1的相互作用，而且還能改變OPTN在細(xì)胞內(nèi)的聚集狀態(tài)；并且在細(xì)胞內(nèi)，TBK1 E696K點(diǎn)突變能特異性地打破TBK1與OPTN的相互作用，但并不顯著影響TBK1與其它受體蛋白的相互作用。此項(xiàng)研究為進(jìn)一步理解和闡明自噬受體蛋白OPTN的作用機(jī)制、蛋白激酶TBK1參與調(diào)節(jié)OPTN介導(dǎo)的選擇性細(xì)胞自噬分子機(jī)制以及TBK1和OPTN相關(guān)的基因突變引起神經(jīng)退行性疾病的致病機(jī)理提供了重要的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。

潘李鋒課題組的博士生李發(fā)祥為本文的*作者，上述研究工作得到科技部國家重點(diǎn)研發(fā)專項(xiàng)項(xiàng)目、科技部“973”計(jì)劃青年專題項(xiàng)目、國家自然科學(xué)基金委面上項(xiàng)目、上海市啟明星項(xiàng)目、生命有機(jī)化學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室及中科院的資助。