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植物生長激素(GH )ELISA kit樣本處理方法

時(shí)間:2015-11-24閱讀:108
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植物生長激素(GH )ELISA 試劑盒植物組織樣本的前處理 

一、勻漿介質(zhì)

 

一般采用磷酸鹽緩沖液(0.1mol/L pH 7.4)或生理鹽水(0.86%或 0.9%),客戶可根據(jù)樣本及測(cè)

定指標(biāo)的情況自行設(shè)定濃度,目的是保持樣本的等滲環(huán)境。 

植物生長激素(GH )ELISA 試劑盒二、組織勻漿液的制備 

 

①、手工勻漿:取組織塊(0.2g~0.5g)在冰冷的勻漿介質(zhì)中漂洗,濾紙拭干,準(zhǔn)確稱重,放

入勻漿管中,按重量(g):體積(ml)=1:4 的比例加入 4 倍體積的勻漿介質(zhì)于勻漿管中,冰水

浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊,將玻璃勻漿管置于冰水浴條件,手動(dòng)勻漿,30 秒/

次,間隔 30秒,重復(fù) 6~8 次,制成20%的勻漿液。 

②、機(jī)器勻漿:取組織塊(0.2g~0.5g)在冰冷的勻漿介質(zhì)中漂洗,濾紙拭干,準(zhǔn)確稱重,放

入勻漿管中,按重量(g):體積(ml)=1:4 的比例加入 4 倍體積的勻漿介質(zhì)于勻漿管中,冰水

浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊,機(jī)械式勻漿機(jī)(組織搗碎機(jī)或內(nèi)切式勻漿機(jī)) ,

10000~15000 轉(zhuǎn)/分,冰水浴條件下,15 秒/次,間隙 30 秒,連續(xù) 3~5 次,制成 20%的勻

漿液。 

③、液氮研磨:取組織塊(0.2g~0.5g)在冰冷的勻漿介質(zhì)中漂洗,濾紙拭干,準(zhǔn)確稱重,放 

入研缽中,用眼科小剪盡快剪碎組織塊,加入液氮研磨至粉末狀(研磨要迅速),加入勻漿 

介質(zhì),充分抽提,制備成 20%的勻漿液。 

鏡檢觀察:取少量組織勻漿作涂片,顯微鏡下觀察細(xì)胞是否破碎,若沒有則可延長勻漿時(shí)間。 

勻漿上清液的制備:將制備好的 20%勻漿液用普通離心機(jī)或低溫低速離心機(jī) 3500 轉(zhuǎn)/分左右,離

心 10~15 分鐘,取上清液進(jìn)行測(cè)定. 

植物生長激素(GH )ELISA 試劑盒三、樣本保存: 

 

        植物組織樣本暫時(shí)不測(cè)定,可立即低溫凍存,溫度越低越好,中間如*凍融,-20℃以下

可保存三個(gè)月,-70℃以下可保存六個(gè)月。 

        制備好的勻漿液建議不要凍存,當(dāng)天進(jìn)行測(cè)定,如放置時(shí)間過長相關(guān)酶活會(huì)有所下降,部

分指標(biāo) 4℃可存放 3~5 天(如 SOD 要存放 2~3 天,MDA 可存放 3~5,總蛋白測(cè)定可存 5~7 天等) 

如指標(biāo)太多可將勻漿上清液分裝保存,每次測(cè)定時(shí)每個(gè)樣本取出一管用于測(cè)定,切勿反復(fù)凍

融。 

植物生長激素(GH )ELISA 試劑盒[注]:磷酸鹽緩沖液作為勻漿介質(zhì),不可用于無機(jī)磷、ATP酶、ATP 含量、羥自由基等相關(guān)檢測(cè)項(xiàng)目; 

生理鹽水作為勻漿介質(zhì),不可用于離子類相關(guān)檢測(cè)項(xiàng)目,如檢測(cè)離子類相關(guān)指標(biāo)可直接用雙蒸水作為勻漿介質(zhì)。 

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