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肺炎支原體分離用雙相培養(yǎng)基

時間:2015-3-11閱讀:143
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[用途] 
用于喉拭標本直接分離肺炎支原體。
   [配法]
    ⑴ 底層瓊脂斜面:其成分與上述支原體半固體瓊脂相同,不加兩性霉素B。無菌分裝于經(jīng)滅菌的鏈霉素空瓶中,每瓶3m1,置成斜面,此為底層。
   ⑵ 液體培養(yǎng)基:其成分與上述支原體傳代用液體培養(yǎng)基相同。但在未高壓滅菌前,再加入葡萄糖1g,美藍0.001g(即10g/L美藍溶液0.1ml),1g/L酚紅溶液2m1,115℃滅菌15min,冷卻后,再加入輔助成分和防止雜菌生長的成分。然后,在上述底層瓊脂斜面上,每瓶再加入液體培養(yǎng)基3~5m1,瓶塞用煮沸滅菌的后口橡皮塞。經(jīng)37℃培養(yǎng)過夜,無菌試驗陰性者,存放4℃冰箱中備用,可保存1月。
   
注:已接種的雙相培養(yǎng)管,培養(yǎng)37℃普通環(huán)境2~4周,觀察結果,陽性生長見雙相管由淡紫色變成綠色,再轉變?yōu)辄S色,因肺炎支原體發(fā)酵葡萄糖,還原美藍。取陽性管用分離支原體固體平皿分離菌落,平血放入含95 %氮氣和5 %二氧化碳環(huán)境中,或放入含5% 二氧化碳環(huán)境中培養(yǎng)2~4周,陽性平皿可見菌落生長。

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