方案優(yōu)勢(shì)

(一)為什么要進(jìn)行抗原修復(fù)? 組織在制作過(guò)程中，由于化學(xué)試劑的作用封閉了抗原，又由于熱的作用致使部分抗原的肽鏈發(fā)生扭曲，致使在免疫組化的染色過(guò)程中不能將其顯示出來(lái)，為了解決上述的問(wèn)題，利用化學(xué)試劑和熱的作用將這些抗原重新暴露出來(lái)或修正過(guò)來(lái)的過(guò)程稱(chēng)為抗原修復(fù)。 在免疫組化染色后的鏡下觀察中，有發(fā)現(xiàn)這樣的結(jié)果，陽(yáng)性物反應(yīng)不強(qiáng)，時(shí)隱時(shí)現(xiàn)，表達(dá)不均勻，有時(shí)可出現(xiàn)假陰性，這是因?yàn)椋?1.組織在用甲醛固定的過(guò)程中所形成的醛鍵可封閉抗原的決定族。甲醛與組織蛋白質(zhì)類(lèi)的反應(yīng)是多樣而復(fù)雜的，因?yàn)樗芎投喾N不同的功能基團(tuán)結(jié)合，在多數(shù)情況下在其間形成橋鍵8。這也是甲醛的一個(gè)作用，因?yàn)樗且环N聚合固定劑，因而能在相鄰的蛋白質(zhì)鍵間形成橋鍵的作用。 2. 甲醛在保存進(jìn)程中會(huì)形成羥甲基，也可封閉抗原決定族。據(jù)French和Edsall的研究認(rèn)為，zui常遇到的甲醇反應(yīng)，就是加到一個(gè)含反應(yīng)性氫原子的化合物中，形成一個(gè)羥甲基化合物。 3.在組織固定過(guò)程中，甲醛與蛋白質(zhì)發(fā)生交聯(lián)，形成醛交聯(lián)蛋白，這種化合物封閉了抗原，使之無(wú)法表達(dá)出來(lái)。 為了解決上述存在的問(wèn)題，更好地暴露出抗原，將其很好地顯示出來(lái)，目前*的方法就是必須進(jìn)行抗原修復(fù)。 (二) 用什么方法進(jìn)行抗原修復(fù)? 至今為止，抗原修復(fù)有許多種方法，在這些方法中，有的是根據(jù)抗體的要求來(lái)進(jìn)行，有的是根據(jù)抗原的表達(dá)程度來(lái)進(jìn)行，我們則對(duì)每種病例每項(xiàng)檢測(cè)，都要求必須進(jìn)行抗原修復(fù)，以達(dá)到抗原全面表達(dá)的*狀態(tài)。 (1)物理化學(xué)試劑抗原修復(fù)法。 1. 真空負(fù)壓抗原修復(fù)法： ① 切片脫蠟至水。 ②0.3%H2O2甲醇真空負(fù)壓處理5分鐘。 ③自來(lái)水洗，蒸餾水洗。 ④0.01M檸檬酸鹽緩沖液(PH6.0)，真空負(fù)壓干燥箱預(yù)先調(diào)至95℃，真空負(fù)壓處理10分鐘。 ⑤待修復(fù)注降至室溫的一，PBS洗3次，隨后按選好的免疫組化染色方法進(jìn)行染色。 2.微波輻射抗原修復(fù)法： ①切片脫蠟至水。 ②0.3%H2O2甲醇處理10分鐘。 ③自來(lái)水洗，蒸餾水洗。 ④ 0.01M檸檬酸鹽緩沖液(PH6.0)，于微波爐內(nèi)微波輻射10分鐘，如檢測(cè)Er和Pr則需要20輻射分鐘左右。 ⑤待修復(fù)液降至室溫后，PBS洗3次，隨后按選好的免疫組織化學(xué)的染色方法進(jìn)行染色。 3.高壓抗原修復(fù)法： ①切片脫蠟至水。 ②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。 ③自來(lái)水洗，蒸餾水洗。 ④切片放入抗原修復(fù)液中，邊同容器放入高壓鍋中加熱至沸騰。蓋上壓力閥至噴汽后持續(xù)1-4分鐘。 ⑤待修復(fù)液恢復(fù)至室溫后，PBS洗3次，隨后按選好的免疫組織化學(xué)染色方法進(jìn)行染色。 4.隔水熱抗原修復(fù)法： ①切片脫蠟至水。 ②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。 ③自來(lái)水洗，蒸餾水洗。 ④切片放入0.01M檸檬酸鹽緩沖液(PH0.6)中，邊同容器一起放入水溶鍋中加熱，其間應(yīng)不斷用溫度計(jì)測(cè)其溫度，待抗原修復(fù)液的溫度達(dá)到有效溫度后(92℃↑)。即開(kāi)始計(jì)時(shí)，持續(xù)40分鐘。 ⑤待抗原修復(fù)液恢復(fù)至室溫后，PBS洗3次，隨后按選定好的免疫組化染色方法進(jìn)行染色。 5.電爐加熱抗原修復(fù)法： ①切片脫蠟至水。 ②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。 ③自來(lái)水洗，蒸餾水洗。 ④ 將切片放入抗原修復(fù)液中于電爐上加熱，不時(shí)用溫度計(jì)測(cè)量溫度，當(dāng)達(dá)92℃后，即可拔離電源，當(dāng)溫度低于92℃時(shí)，再插上電源，如此反復(fù)持續(xù)至10分鐘左右。 ⑤待抗原修復(fù)液降至室溫后，PBS洗3次，隨后按選定的免疫組化染色方法進(jìn)行染色。 對(duì)各種抗原修復(fù)方法的評(píng)價(jià)。