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谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)elisa原理說(shuō)明

時(shí)間:2015-3-2閱讀:231
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谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)elisa原理說(shuō)明 廣銳生物-國(guó)內(nèi)高、優(yōu)Elisa試劑盒供應(yīng)商

用于測(cè)定小鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)的含量。
實(shí)驗(yàn)原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平。用純化的小鼠谷
丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入谷丙轉(zhuǎn)氨
酶(ALT),再與HRP 標(biāo)記的谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,
經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下
轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm
波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)濃度。

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樣本處理及要求:
1.血清:室溫血液自然凝固10-20 分鐘,離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上
清,保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20 分鐘后,
離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)該再
次離心。
3.尿液:用無(wú)菌管收集,離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中
如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/
分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃
度達(dá)到100 萬(wàn)/ml 左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20 分鐘
左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
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5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?BR>用。標(biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將
標(biāo)本勻漿充分。離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),
其余冷凍備用。

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