【中文名稱】：兔子高遷移率族蛋白B1，HMGB-1，ELISA試劑盒

【英文名稱】： Rabbit High mobility group protein B1,HMGB-1 ELISA Kit 

【產(chǎn)品規(guī)格】:96T/48T。

【保存條件】：2-8℃低溫保存

【保質(zhì)期】：6個，所有試劑盒均提供批次。

【試劑盒成分】：酶標板，試劑，標準品等。

兔子高遷移率族蛋白B1，HMGB-1，ELISA試劑盒

檢測范圍：人、綿羊、小鼠、大鼠、豬、兔、山羊、牛、馬、豬、其它動物細胞因子、植物細胞因子、骨代謝、細胞凋亡、激素內(nèi)分泌、活性多肽、肝纖維化、自身抗體、血栓與止血、腫瘤、自身抗體科研Elisa檢測試劑盒。  

用于科研方面，不用于臨床診斷

 ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。此項技術(shù)自70年代初問世以來，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。 

原理

ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法(圖a)、用于檢測抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。

操作步驟

　　1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為1200pg/ml，800pg/ml ，400pg/ml，200pg/ml，100pg/ml)。

　2.加樣：分別設(shè)空白孔(空白比照孔不加樣品及酶標試劑，其他各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不涉及孔壁，輕輕晃動混勻。

　3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

　4.配液：將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

　5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

　6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

　7.溫育：操作同3。

　8.洗滌：操作同5。

　9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

　10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

　11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序丈量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

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