細胞凋亡過程中可觀察到系列形態(tài)學特征和生化特征。早期凋亡信號的效應產(chǎn)生于胞內(nèi)，此時細胞膜保持完整。MERCK公司已發(fā)展出幾種方法以檢測凋亡細胞胞內(nèi)的多種效應，包括：DNA段的檢測、膜對稱性的變化、caspases激活、以及細胞死亡相關蛋白水平的變化等。多數(shù)檢測使用的底物和Marker適用于絕大多數(shù)種類的哺乳動物。
　　
　　凋亡細胞染色體DNA以核小體為單位的切割導致細胞不可逆死亡?？梢圆捎肗ucleosomeELISA，對產(chǎn)生的單體及寡聚核DNA段進行定量。核小體的DNA成分被捕獲于酶標板上，使用*標記的抗組蛋白抗體檢測捕獲的核小體數(shù)量。組蛋白-DNA段的量反應了一個特定樣品中死亡及瀕臨死亡的細胞的量。
　　
　　DNA段也可通過片段末端標記進行原位檢測，MERCK提供基于TUNEL方法的試劑盒。DNA段末端標記可通過熒光染料或比色底物方法進行檢測。另外，細胞形態(tài)的變化如胞膜皺摺或出泡、核染色質(zhì)致密、胞質(zhì)濃縮等，都可作為細胞凋亡的證據(jù)。采用熒光染料進行末端標記的可用流式細胞技術進行定量，其光散射變化也可支持由單一參數(shù)得出的結(jié)論。DNA段可以從凋亡細胞中分離并使用瓊脂糖電泳進行分析。約180bp的多倍寡核小體片段在電泳上呈典型的梯狀條帶，可進一步證實凋亡的存在。若使用PelletPaintCo-Precipitant，只需室溫操作，兩分鐘即幫助DNA沉淀更快捷方便。
　　
　　線粒體膜電位和膜通透性的變化也是凋亡細胞一個重要特點。凋亡細胞另一個生化特征是細胞膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰*從胞質(zhì)轉(zhuǎn)至胞外。膜聯(lián)蛋白中的AnnexinⅤ，是一種磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰*有強親和力。通過使用AnnexinⅤ-FITC(PF032)或AnnexinⅤ-BiotinApoptosisDetectionKit，及RAPIDTM方法進行凋亡細胞早期檢測?？墒褂昧魇郊毎麅x或熒光顯微鏡監(jiān)測。同時使用PI，根據(jù)細胞膜的通透性區(qū)分早期凋亡細胞和壞死細胞。
　　
　　凋亡過程中細胞核同樣發(fā)生了結(jié)構(gòu)變化。接收到凋亡信號后,核基質(zhì)蛋白(NMPs)釋放。NMP的釋放與細胞死亡相，MERCK的CellDeathDetection(NMP)ELISA可定量檢測細胞培養(yǎng)上清中的NMP水平變化。此種檢測方法優(yōu)于其它方法的原因在于可以直接檢測組織培養(yǎng)基中NMPs的水平，而不需細胞總裂解物，從而避免了細胞計數(shù)和樣品準備等操作。除了結(jié)構(gòu)變化，凋亡細胞*水平會降低，可通過GlutathioneApoptosisAssayKit進行檢測。
　　
　　凋亡可被系列環(huán)境危害、發(fā)育信號等誘導產(chǎn)生，免疫耐受的誘導和保持，涉及細胞表面受體的參與。Fas(APO-1,CD95)是主要的死亡受體，在多種細胞中引發(fā)凋亡過程。Fas配體與Fas結(jié)合，激活的Fas進而激活包含caspase在內(nèi)的幾種效應蛋白。FAS/APO-1ELISAKit可以檢測細胞抽提物、組織培養(yǎng)物、血清中Fas的水平。同樣，F(xiàn)asLigandELISA(QIA27)可定量檢測上述各種形式樣品中的膜結(jié)合FasL和可溶性FasL。兩種檢測試劑盒都具有很好的靈敏度和度。另外兩種ELISA試劑盒都提供96孔板形式，適于高通量篩選。
　　
　　現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)幾種抑制凋亡的蛋白。Bcl-2家族是此領域現(xiàn)在了解zui多的一系列蛋白。Bcl-2的切割和失活可用Bcl-2ELISA監(jiān)測。已發(fā)現(xiàn)凋亡過程中Bcl-2水平降低，DNA降解片段、AnnexinⅤ的結(jié)合、NMP水平增加等。為*了解細胞凋亡，一個具體實驗可能需要聯(lián)合應用以上述及的幾種檢測手段以確定凋亡進程。上海友騰生物傾力為客戶提供上萬種科研試劑，提供*、zui全、zui有效的科研試劑產(chǎn)品，質(zhì)量被全國各大院?？蒲袡C構(gòu)認可。咨詢!同時代理IBL，DRG，R&D，HCB等品牌*試劑盒。
　　
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