一、準(zhǔn)備工作
準(zhǔn)備工作對開展細(xì)胞培養(yǎng)異常重要,工作量也較大,應(yīng)給予足夠的重視,準(zhǔn)備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或無法進(jìn)行.準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒,培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌,無菌室或超凈臺(tái)的清潔與消毒,培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試,具體內(nèi)容可參閱有關(guān)文獻(xiàn).
二、取材
在無菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞,經(jīng)過一定的處理(如消化分散細(xì)胞、分離等)后接入培養(yǎng)皿中,這一過程稱為取材.如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無取材這一過程.機(jī)體取出的組織細(xì)胞的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。
三、培養(yǎng)
將取得的組織細(xì)胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過程稱為培養(yǎng).如系組織塊培養(yǎng),則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部,幾個(gè)小時(shí)后組織塊可貼牢在底部,再加入培養(yǎng)基.如系細(xì)胞培養(yǎng),一般應(yīng)在接入培養(yǎng)器皿之前進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),按要求以一定的量接入培養(yǎng)器皿并直接加入培養(yǎng)基.細(xì)胞進(jìn)入培養(yǎng)器皿后,立即放入培養(yǎng)箱中,使細(xì)胞盡早進(jìn)入生長狀態(tài).
正在培養(yǎng)中的細(xì)胞應(yīng)每隔一定時(shí)間觀察一次,觀察的內(nèi)容包括細(xì)胞是否生長良好,形態(tài)是否正常,有無污染,培養(yǎng)基的PH是否太酸或太堿,此外對培養(yǎng)溫度和CO2濃度也要定時(shí)檢查.
四、凍存及復(fù)蘇
為了保存細(xì)胞,特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株,要將細(xì)胞凍存.凍存的溫度一般用液氮的溫度－196℃,將細(xì)胞收集至凍存管中加入含保護(hù)劑的培養(yǎng)基,以一定的冷卻速度凍存,zui終保存于液氮中.在極低的溫度下,細(xì)胞保存的時(shí)間幾乎是無限的.
復(fù)蘇一般采用快融方法,即從液氮中取出凍存管后,立即放入37℃水中,使之在一分鐘內(nèi)迅速融解.然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進(jìn)行培養(yǎng).
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