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技術(shù)文章

科興技術(shù)梳理細(xì)胞的所有冷凍方法

閱讀：344發(fā)布時(shí)間：2016-1-4

    細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái)，這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而且適度地保存一定量的細(xì)胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種，起到了細(xì)胞保種的作用。除此之外，還可以利用細(xì)胞凍存的形式來(lái)購(gòu)買(mǎi)、寄贈(zèng)、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞。 細(xì)胞凍存時(shí)向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點(diǎn)降低，加之在緩慢凍結(jié)條件下，細(xì)胞內(nèi)水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細(xì)胞損傷。 采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細(xì)胞存活。標(biāo)準(zhǔn)冷凍速度開(kāi)始為-1 到 -2℃/min，當(dāng)溫度低于-25℃時(shí)可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃)。

細(xì)胞冷凍方法：

1.４℃以下慢慢地冷凍，保存于液態(tài)氮中（-196℃）。

2.37℃快速解凍。

3.保護(hù)劑（抗凍劑）：添加甘油 （glycerol） （ I0 %左右 ） 或dimethy1sulfoxide （DMSO） （ 5- 10% ） 。

4.有些細(xì)胞如果采用上述的方法時(shí)，無(wú)法得到高的存活率。此時(shí)，則必需考慮可能傷害細(xì)胞的機(jī)制，添加劑之作用等而來(lái)找出適當(dāng)?shù)臈l件來(lái)修正。

    備注：經(jīng)過(guò)冷凍保存后的細(xì)胞，其生存率會(huì)下降，冷凍時(shí)之冷卻速度，保存溫度，解凍時(shí)升高溫度的速度以及添加之冷凍保存液之種類(lèi)、濃度等都可影響細(xì)胞存活率。

 


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