蛋白胨細(xì)胞冷凍保存應(yīng)在生長(zhǎng)良好的狀態(tài)下進(jìn)行

蛋白胨細(xì)胞冷凍的注意事項(xiàng)：

    （1）欲冷凍保存之蛋白胨細(xì)胞應(yīng)在生長(zhǎng)良好且存活率高之狀態(tài)，約為80～90％致密度。冷凍前檢測(cè)細(xì)胞是否仍保有其*性質(zhì)，例如hybridoma應(yīng)在冷凍保存前一至二日測(cè)試是否有抗體之產(chǎn)生。

    （2）細(xì)胞在液氮中可*凍存無(wú)*，而不會(huì)影響細(xì)胞活力；在-70度可保存數(shù)月。

    （3）注意冷凍保護(hù)劑之品質(zhì)。DMSO應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí)，無(wú)菌且無(wú)色(以0.22micron　FGLP　flon過濾或是直接購(gòu)買無(wú)菌產(chǎn)品，如Sigma D-2650)，以5～10ml小體積分裝，4℃避光保存，勿作多次解凍。Glycerol亦應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí)，以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用，因*儲(chǔ)存后對(duì)細(xì)胞會(huì)有毒性。本方法中先制備雙倍凍存液，可避免DMSO直接加入時(shí)釋放的熱量對(duì)細(xì)胞的損傷。緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液是使細(xì)胞逐步適應(yīng)高滲，可降低細(xì)胞受損。DMSO可能引起部分白血病細(xì)胞株的分化，可換用10%甘油凍存。

    （4）冷凍保存之細(xì)胞濃度

    （5）冷凍保護(hù)劑濃度為5或10％DMSO，若是不確定蛋白胨細(xì)胞之冷凍條件，在做冷凍保存之同時(shí)，亦應(yīng)作一個(gè)backup culture，以防止冷凍失敗。

    （6）凍存可用10%～90%的血清，一般高濃度血清有助于維護(hù)細(xì)胞活力，此處介紹20%終濃度有利于細(xì)胞懸浮而少沉積（4度時(shí)），復(fù)蘇存活率在80%～90%以上，對(duì)原代培養(yǎng)細(xì)胞，以90%血清凍存更為有效。