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當(dāng)前位置:上海谷研試劑有限公司>>技術(shù)文章>>培養(yǎng)基細(xì)胞的生命期分有幾個(gè)階段
所謂培養(yǎng)基細(xì)胞生命期,是指細(xì)胞在培養(yǎng)中持續(xù)增殖和生長(zhǎng)的時(shí)間。體內(nèi)組織細(xì)胞的生存期與完整機(jī)體的死亡衰老基本相一致。組織和細(xì)胞在培養(yǎng)中生命期如何?這要看細(xì)胞的種類(lèi)、性狀和原供體的年齡等情況。人胚二倍體成纖維細(xì)胞培養(yǎng),在不凍存和反復(fù)傳代條件下,可傳30~50代,相當(dāng)于150~300個(gè)細(xì)胞增殖周期。如供體為成體或衰老個(gè)體,則生存時(shí)間較短;如培養(yǎng)的為其它細(xì)胞如肝細(xì)胞或腎細(xì)胞培養(yǎng)基,生存時(shí)間更短,僅能傳幾代或十幾代。只有當(dāng)細(xì)胞發(fā)生遺傳性改變,如獲永生性或惡性轉(zhuǎn)化時(shí),細(xì)胞的生存期才可能發(fā)生改變。對(duì)此以后將詳述。
正常細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),不論細(xì)胞的種類(lèi)和供體的年齡如何,在細(xì)胞全生存過(guò)程中,大致都經(jīng)歷以下三個(gè)階段:
1.原代培養(yǎng)基期:
也稱(chēng)初代培養(yǎng),即從體內(nèi)取出組織接種培養(yǎng)到*次傳代階段,一般持續(xù)1一4周。此期細(xì)胞呈活躍的移動(dòng),可見(jiàn)細(xì)胞分裂,但不旺盛。初代培養(yǎng)細(xì)胞與體內(nèi)原組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動(dòng)上相似性大。細(xì)胞群是異質(zhì)的,也即各細(xì)胞的遺傳性狀互不相同,細(xì)胞相互依存性強(qiáng)。如把這種細(xì)胞群稀釋分散成單細(xì)胞,在軟瓊脂培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)時(shí),細(xì)胞克隆形成率很低,即細(xì)胞獨(dú)立生存性差。克隆形成率即細(xì)胞群被稀釋分散成單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)時(shí),形成細(xì)胞小群(克?。┑陌俜?jǐn)?shù)。初代培養(yǎng)細(xì)胞多呈二倍體核型;由于原代培養(yǎng)細(xì)胞和體內(nèi)細(xì)胞性狀相似性大,是檢測(cè)藥物很好的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。
2.傳代期:
初代培養(yǎng)基細(xì)胞一經(jīng)傳代后便改稱(chēng)做細(xì)胞系。在全生命期中此期的持續(xù)時(shí)間zui長(zhǎng)。在培養(yǎng)條件較好情況下,細(xì)胞增殖旺盛,并能維持二倍體核型,呈二倍體核型的細(xì)胞稱(chēng)二倍體細(xì)胞系。為保持二倍體細(xì)胞性質(zhì),細(xì)胞應(yīng)在初代培養(yǎng)基期或傳代后早期凍存。當(dāng)前世界上常用細(xì)胞均在不出十代內(nèi)凍存。如不凍存,則需反復(fù)傳代以維持細(xì)胞的適宜密度,以利于生存。但這樣就有可能導(dǎo)致細(xì)胞失掉二倍體性質(zhì)或發(fā)生轉(zhuǎn)化。一般情況下當(dāng)傳代10~50次左右,細(xì)胞增殖逐漸緩慢,以至*停止,細(xì)胞進(jìn)入第三期。
3.衰退期:
此期細(xì)胞仍然生存,但增殖很慢或不增殖;細(xì)胞培養(yǎng)基形態(tài)輪廓增強(qiáng),zui后衰退凋亡。在細(xì)胞生命期階段,少數(shù)情況下,在以上三期任何一點(diǎn)(多發(fā)生在傳代末或衰退期),由于某種因素的影響,細(xì)胞可能發(fā)生自發(fā)轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化的標(biāo)志之一是細(xì)胞可能獲得永生性或惡性性。細(xì)胞永生性也稱(chēng)不死性,即細(xì)胞獲持久性增殖能力,這樣的細(xì)胞群體稱(chēng)無(wú)限細(xì)胞系,也稱(chēng)連續(xù)細(xì)胞系。在早期文獻(xiàn)中無(wú)限細(xì)胞系也稱(chēng)已建立細(xì)胞系,現(xiàn)已不用。無(wú)限細(xì)胞系的形成主要發(fā)生在第二期末,或第三期初階段。細(xì)胞培養(yǎng)基獲不死性后,核型大多變成異倍體。細(xì)胞轉(zhuǎn)化亦可用人工方法誘發(fā),轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞也可能具有惡性性質(zhì)。細(xì)胞永生性和惡性性非同一性狀。
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