elisa實(shí)驗(yàn)原理

用人工合成或基因工程表達(dá)的HEV特異性多肽抗原包被微孔板，加入待檢血清與其反應(yīng)，再加酶標(biāo)抗人IgG和底物顯色。

主要試劑與器材

1.elisa試劑盒:內(nèi)含包被用HEV特異性多肽、酶標(biāo)抗人IgG、陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清、底物、洗滌液、稀釋液等。

2.待檢血清。

3.酶標(biāo)儀等。

操作步驟

1.用HEV特異性多肽抗原包被微孔板，室溫12h，洗3次。

2.每孔加稀釋液100μl，待檢血清5μl，37℃30min。設(shè)陽(yáng)性、陰性對(duì)照。洗6次。

3.每孔加HRP-抗人IgG100μl，37℃30min，洗6次。

4.每孔加底物（TMB-H2O2）液100μl，室溫顯色15min。

5.加入10g/L SDS 50μl終止反應(yīng)。

6.用酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)測(cè)各孔OD值。

結(jié)果分析

1.陰性對(duì)照平均OD值＜0.10，陽(yáng)性對(duì)照≥1.0為elisa試劑盒有效和操作無(wú)誤。

2.P/N=(待檢血清OD值/陰性對(duì)照平均OD值）≥2.1為陽(yáng)性，反之為陰性。