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技術(shù)文章

分光光度計的使用及原理介紹

閱讀:2498發(fā)布時間:2014-7-31

  導(dǎo)讀:分光光度計屬于精密儀器,應(yīng)當妥善保管和精心維護,這樣才能保證分光光度計長期使用、長期的穩(wěn)定可靠、測量精度高。元析公司在多年的生產(chǎn)和應(yīng)用的過程中,得到了一套在一定環(huán)境下維護分光光度計的經(jīng)驗,具體如下:
  
  1、環(huán)境溫度在條件容許的情況下,盡量保持在15-30攝氏度之間,這樣能保持電器件穩(wěn)定工作,不易老化,使分光光度計不易損壞,燈源的使用壽命得到延長。若條件不容許,在高溫的情況下,縮短開機時間,使用分光光度計,使電器件不要長期保持在高溫下。在低溫下,使預(yù)熱時間比常溫下的預(yù)熱時間要長,這樣能保證在儀器穩(wěn)定的情況下進行測試。
  
  2、環(huán)境濕度在條件容許的情況下,盡量保持在60%以下,這樣能保證光度計內(nèi)部的光學(xué)件和電器件不易受潮、腐蝕、和上霉。若條件不容許,在高濕度和低濕度的情況盡量保持通風(fēng)。
  
  3、環(huán)境在條件容許的情況下盡量保持潔凈,打掃環(huán)境時動作不宜太大,不要揚起灰塵,打掃之前用防塵罩蓋上分光光度計,不要讓灰塵進入分光光度計內(nèi)部。
  
  分光光度計類型,及應(yīng)用領(lǐng)域:
  
  分光光度計有哪幾種不同的分類方式:
  
  1.分光光度計按照波長及應(yīng)用領(lǐng)域的不同可以分為:
  
 ?。?)可見光分光光度計:測定波長范圍為400~760nm的可見光區(qū);
  
  (2)紫外分光光度計:測定波長范圍為200~400nm的紫外光區(qū);
  
 ?。?)紅外分光光度計:測定波長范圍為大于760nm的紅外光區(qū);
  
  分光光度計zui常見的用途和常用波長:
  
  1.核酸的定量
  
  核酸的zui高吸收峰的吸收波長260nm。利用260nm的波長可以定量測量溶于緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA的濃度。
  
  除了核酸濃度,分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度。如A260/A280的比值,用于評估樣品的純度,因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0,表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。
  
  A230表示樣品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,*等,較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。
  
  A320檢測溶液的混濁度和其他干擾因子。純樣品,A320一般是0。
  
  2.蛋白質(zhì)的直接定量
  
  這種方法是在280nm波長,直接測試蛋白。選擇Warburg公式,光度計可以直接顯示出樣品的濃度,或者是選擇相應(yīng)的換算方法,將吸光值轉(zhuǎn)換為樣品濃度。
  
  3.細菌細胞密度
  
  細菌培養(yǎng)過程中,需要采用分光光度計準確測定細菌細胞密度。
  
  OD600是追蹤液體培養(yǎng)物中微生物生長的標準方法。在600nm波長下,以未加菌液的培養(yǎng)液作為空白液,測量定量培養(yǎng)后的含菌培養(yǎng)液。
  
  (4)熒光分光光度計:用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜;
  
 ?。?)原子吸收分光光度計:光源發(fā)出被測的特征光譜輻射,被經(jīng)過原子化器后的樣品蒸氣中的待測元素基態(tài)原子所吸收,通過測定特征輻射被吸收的大小,來求出被測元素的含量。
  
  2.分光光度計按自動化程度分類:可分為手動、半自動、自動分光光度計。
  
  3.分光光度計按軟件可分為:帶掃描、不帶掃描。

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