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上海哈靈生物科技有限公司
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細(xì)胞沉默調(diào)節(jié)蛋白1 （SIRT1）活性熒光定量檢測(cè)說(shuō)明書(shū)
2015-4-17 閱讀(694)
| 提 供 商 | 上海哈靈生物科技有限公司 | 資料大小 | 49KB |
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| 資料圖片 | 下載次數(shù) | 266次 | |
| 資料類(lèi)型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數(shù) | 694次 |
主要用途
細(xì)胞沉默調(diào)節(jié)蛋白1 （SIRT1）活性熒光定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)熒光探針氨甲基香豆素標(biāo)記人工合成的乙酰化p53多肽底物，經(jīng)過(guò)SIRT1脫乙?；螅晃稽c(diǎn)特異性氨基肽酶水解，釋放黃色對(duì)硝基苯胺，即采用熒光法來(lái)測(cè)定細(xì)胞裂解萃取樣品中酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解萃取液樣品（動(dòng)物、人體）、核蛋白樣品、部分或*純化酶樣品中SIRT1的活性定量檢測(cè)，以及抑制劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定。
技術(shù)背景
人體組蛋白脫乙酰基酶（histone deacetylase；HDAC）家屬分成三類(lèi)共20多個(gè)蛋白：種類(lèi)I（class I）與酵母Rpd3蛋白同源，包括HDAC1、2、3、8，存在于細(xì)胞核中；種類(lèi)II（class II）與酵母Hda1蛋白同源，包括HDAC4、5、6、7、9a、9b、10和HDRP/MITR，存在于細(xì)胞核和細(xì)胞漿里；上述兩大種類(lèi)的蛋白分子催化結(jié)構(gòu)域含有鋅，且曲古菌素A（trichostatin A；TSA）敏感。種類(lèi)III（class III）為NAD+輔助因子必需，又稱(chēng)為sirtuins，與酵母Sir2（Silent Information Regulator 2）同源，包括SIRT1至7等，為曲古菌素A（trichostatin A；TSA）不敏感型賴(lài)氨酸脫乙酰基酶（lysyl-deacetylase）。催化賴(lài)氨酸脫乙?；?/span>反應(yīng)，以及由NAD+和乙酰（acetyl）基團(tuán)轉(zhuǎn)化產(chǎn)生的煙酰胺（nicotinamide）和O-乙酰ADP核糖（O-acetyl-ADP-ribose）。SIRT1位于細(xì)胞核內(nèi)，與酵母Sir2同源性zui高。其功能在于調(diào)節(jié)p53活性和抑制細(xì)胞凋亡。基于人工合成的乙?；痯53（379至382氨基酸位點(diǎn)）多肽底物Ac-Arg—His-Lys-Lys（Ac）具有抗氨基肽酶切離的功能，首先使用熒光染料氨甲基香豆素（aminomethylcoumarin；AMC）來(lái)標(biāo)記乙酰化p53多肽底物，其次進(jìn)行脫乙?；瑉ui后底物進(jìn)一步在氨基肽酶的催化酶解，釋放出具有強(qiáng)烈熒光的7-氨-4甲基香豆素（7-amino-4-methylcoumarin；AMC）（激發(fā)波長(zhǎng)350-360nm；散發(fā)波長(zhǎng)450-465nm），由此來(lái)定量測(cè)定沉默調(diào)節(jié)蛋白1的活性。其反應(yīng)系統(tǒng)為：
