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細(xì)胞蛋白激酶A（PKA）活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）
主要用途
細(xì)胞蛋白激酶A（PKA）活性比色法定量檢測試劑是一種旨在通過多肽底物受到PKA磷酸化后，進(jìn)而由丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶連續(xù)循環(huán)法反應(yīng)系統(tǒng)，測定產(chǎn)生ADP過程中，伴隨的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）的氧化反應(yīng)， 即采用比色法測定其氧化后峰值的變化，以分析細(xì)胞裂解樣品中PKA活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解萃取液樣品（動物、人體）、部分或*純化酶樣品中PKA激酶的定量檢測，以及抑制劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，高度敏感。
技術(shù)背景

注意事項(xiàng)
1． 本產(chǎn)品為25次操作，包括背景操作
2． 操作時，須戴手套
3． 系統(tǒng)操作過程中，背景測定只需1次
4． 樣品處理忌用磷酸緩沖溶液
5． 樣品須澄清，至關(guān)重要
6． 加入底物液（Reagent F）后3秒內(nèi)即刻比色測定
7． 測定值由高到低變化；測定可持續(xù)30分鐘
8． 比色測定后，比色皿須清洗*
9． 樣本測定0分鐘讀數(shù)高于30分鐘讀數(shù)表明具有酶活性
10．建議待測樣本蛋白濃度為50微克/5微升（本公司提供 Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－）
11．如果待測樣品濃度過高或過低，可以調(diào)整樣品濃度
12．可以使用蛋白激酶A抑制劑（PKA-PKI）作為抑制劑對照或陰性對照
13．蛋白激酶A活性單位濃度定義：在30℃溫度下，pH 7.5條件下，每分鐘內(nèi)能夠氧化1微摩爾還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）所需的酶量作為一個

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蛋白激酶A（protein kinase A；PKA），又稱cAMP依賴性蛋白激酶（cAMP dependent protein kinase），是第二信使依賴性酶。通過影響腺苷酸環(huán)化酶（adenylate cyclase；AC）和磷酸二酯酶（phosphodiesterase）的活性，而決定cAMP水平，達(dá)到調(diào)節(jié)PKA活性，進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞對于各種外部刺激的反應(yīng)，包括細(xì)胞生長、代謝、DNA復(fù)制、細(xì)胞分裂、肌動蛋白細(xì)胞骨架重排等。該全酶（holoenzyme）具有兩個催化亞體和兩個調(diào)節(jié)亞體構(gòu)成的四聯(lián)體結(jié)構(gòu)。cAMP結(jié)合調(diào)節(jié)亞體，而釋放出活化的催化亞體，產(chǎn)生目標(biāo)蛋白上絲/蘇氨酸（serine/threonine）的磷酸化，諸如CREB、Histone H1、CREM、NF-κB和核受體等，而調(diào)控一系列細(xì)胞活動。其磷酸化目標(biāo)序列為Arg-Arg-X-Ser/Thr或Lys-Arg-X-X- Ser/Thr。蛋白激酶A 至少有兩個亞酶：I型亞酶存在于胞漿內(nèi)，而二型亞酶與細(xì)胞膜、細(xì)胞器和細(xì)胞骨架相關(guān)?；诘孜颴XXXXX，在ATP的存在下，受到PKA激酶的磷酸化，獲得產(chǎn)物磷酸化多肽，進(jìn)而通過丙酮酸激酶（pyruvate kinase；PK）和乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase；LDH）反應(yīng)系統(tǒng)中，還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），其峰值的變化（340nm），來定量分析蛋白激酶A的活性。其反應(yīng)方式為：
產(chǎn)品內(nèi)容
清理液（Reagent A） 毫升
裂解液（Reagent B） 毫升
緩沖液（Reagent C） 毫升
酶促液（Reagent D） 微升
反應(yīng)液（Reagent E） 微升
底物液（Reagent F） 微升
陰性液（Reagent G） 微升