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ELISA原理酶聯(lián)免疫吸附測定的四種方法
2013-8-29 閱讀(1024)
ELISA原理酶聯(lián)免疫吸附測定
抗體或抗原可以吸附在合適的載體上，酶標(biāo)記抗體或抗原相應(yīng)的抗原或抗體形成酶標(biāo)記的抗原抗體免疫復(fù)合物，在一定量底物的參與下，酶催化底物在復(fù)合物上水解，氧化或還原成為另一種帶色的物質(zhì)。因為在特定的條件下，酶的降解底物和出現(xiàn)光彩是成正比的，所以可以應(yīng)用分光光度計進行測定，從而計算出到場反應(yīng)的抗原和抗體的含量。這便是Peter Perlmann 和Eva Engvall所創(chuàng)建的ELISA技術(shù)的原理。
根據(jù)所用固相載體的區(qū)別，ELISA又分為普通ELISA和Dot-ELISA。
按照抗體或抗原在固相載體上不同的吸附方式，又根據(jù)使用不同的抗體比如能與抗原直接發(fā)生反應(yīng)的抗體（通常稱為一抗），能與一抗起免疫聯(lián)合反應(yīng)的標(biāo)有酶的抗體（通常稱為酶標(biāo)二抗），ELISA分解出多項不同測定方式。
ELISA一樣通常分為一下幾種類型：
（1）直接法：起首將抗原吸附于載體外貌，然后將酶標(biāo)記抗體與該抗原反應(yīng)結(jié)合，形成酶標(biāo)記的免疫復(fù)合物，zui后參加底物產(chǎn)生有色的物質(zhì)，進行光密度測定，算出抗體存在量。
（2）間接法：首先將抗原吸附于載體表面，然后加抗血清，使特異性抗體（*抗體）與抗原結(jié)合，再加酶標(biāo)記抗球卵白（第二抗體，即抗*抗體的抗體），與*抗體結(jié)合，形成酶標(biāo)記的免疫復(fù)合物，zui后加入底物產(chǎn)生有色的物質(zhì)，進行光密度測定，算出抗體存在量。
（3）雙重抗體法：首先將抗體吸附于載體表面，形成抗體球卵白致敏載體表面，然后加抗原溶液，使抗原與抗體結(jié)合，再加入酶標(biāo)志的抗體球卵白，與被致敏載體表面吸附的抗原結(jié)合，形成酶標(biāo)記的免疫復(fù)合物，zui后加入底物產(chǎn)生有色的物質(zhì)，進行光密度測定，算出抗原存在量。ELISA雙重抗體法也稱ELISA雙重抗體夾心法，此法能削弱非特異顏色的干擾，而且在測定時可不做空白比較。
（4）酶標(biāo)志抗原競爭法：首先將抗體吸附于載體表面，形成抗體球卵白的致敏載體表面，然后加入以不一樣比例混合的抗原和酶標(biāo)記的抗原溶液，與吸附在載體上的抗體產(chǎn)生免疫反應(yīng)，形成酶標(biāo)記抗原與抗體的免疫復(fù)合物和非標(biāo)記抗原與抗體的免疫復(fù)合物，zui后加入底物，通過酶的底物水解量（測定光密度而知）來確定未知溶液有無抗原及抗原量數(shù)量。
酶標(biāo)志抗原競爭法利用混合的未標(biāo)記的抗原和酶標(biāo)志抗原相互競爭抗體上的結(jié)合點，從而進行抗原的定量。未標(biāo)記的抗原的量越大，則酶標(biāo)記抗原和抗體的結(jié)合就越受到抑制。但是競爭法在實行時比較繁瑣，有時候在抗原混合液與相應(yīng)抗體孵育后，在測定游離抗原與抗體相結(jié)合抗原的活性以前，要行鹽析或有機溶劑沉淀或第二抗體沉淀等方式把兩種不同存在形態(tài)的抗原分開。而且在參加底物后，容易產(chǎn)生血清色的物質(zhì)。因此，每次測定時都需做空白對照。因為這些缺點，酶標(biāo)記抗原競爭法很少使用。
