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上海哈靈生物科技有限公司
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純化核糖體蛋白質(zhì)萃取試劑盒產(chǎn)品說明書
2023-8-14 閱讀(107)
主要用途
純化核糖體（ribosome）蛋白質(zhì)萃取試劑是一種旨在通過化學和有機溶劑處理，去除RNA成分，獲得完整而純化的核糖體蛋白系統(tǒng)的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種純化核糖體（動物、人體、植物、細菌等）的蛋白質(zhì)預制備?？芍苯佑糜谔囟ǖ鞍缀罄m(xù)純化、蛋白一維或二維電泳、西方雜交、免疫抗體和質(zhì)譜分析等等。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定。
技術(shù)背景
核糖體（ribosome）是一種細小顆粒的核糖蛋白復合物（ribonucleoprotein complex），生命細胞制造蛋白質(zhì)的非膜性結(jié)構(gòu)元素和轉(zhuǎn)譯裝置（translational apparatus），由RNA和蛋白質(zhì)組成，具有多肽轉(zhuǎn)移酶的活性。其分成2個亞體：大亞體和小亞體。核糖體通過大亞體結(jié)合轉(zhuǎn)運核糖體（tRNA），而小亞體結(jié)合信使RNA（mRNA），然后閱讀RNA提供的信息，轉(zhuǎn)譯（translation）成氨基酸，連接成蛋白分子。真核生物的核糖體位于胞質(zhì)（游離核糖體）、線粒體和葉綠體中。其中胞漿核糖體為80S核糖體，由40S小亞體和60S大亞體組成：60S由5S RNA、28S RNA、5.8S亞基和49個蛋白組成；而40S由18S RNA和33個蛋白組成。線粒體和葉綠體核糖體與原核生物相似，為70S核糖體，由30S小亞體和50S大亞體組成：50S包括5S、23S RNA和34個蛋白；30S包括16S RNA和21個蛋白。
產(chǎn)品內(nèi)容
緩沖液（Reagent A） 毫升
清理液（Reagent B） 毫升
沉淀液（Reagent C） 毫升
萃取液（Reagent D） 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里；試劑具有腐蝕性和揮發(fā)性，注意操作安全和密閉瓶蓋；有效保證6月
用戶自備
1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器
15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
（微型）臺式離心機：用于樣品操作
渦旋震蕩儀：用于混勻
實驗步驟
1． 從－70℃冰箱里取出核糖體顆粒樣品，放進冰槽里
2． （選擇步驟）如果核糖體樣品不是顆粒狀態(tài)，使用適量的緩沖液（Reagent A），調(diào)整到1毫升體系
3． （選擇步驟）加入xx微升清理液（Reagent B），混勻
4． （選擇步驟）放進4℃（微型）臺式離心機離心10分鐘，速度為10000g
5． （選擇步驟）小心抽去上清液
6． 加入xx微升緩沖液（Reagent A）到核糖體顆粒樣品中，混勻顆粒群
7． 加入xx微升沉淀液（Reagent C），混勻
8． 放進冰槽中孵育60分鐘，期間每隔15分鐘渦旋震蕩60秒
9． 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
10． 小心移取800微升上清液到新的15毫升錐形離心管
11． 加入xx毫升萃取液（Reagent D），混勻
12． 放進—20℃冰箱里，孵育2小時
13． 放進臺式離心機離心10分鐘，速度為10000g
14． 小心抽去上清液
15． 加入xx毫升萃取液（Reagent D）
16． 放進－20℃冰箱里過夜
17． 放進臺式離心機離心10分鐘，速度為10000g
18． 小心抽去上清液
19． 加入xx毫升清理液（Reagent B）
20． 放進－20℃冰箱里孵育30分鐘
21． 放進臺式離心機離心10分鐘，速度為10000g
22． 小心抽去上清液
23． 空氣中揮干
24． 若暫時不予后續(xù)處理，保存在－20℃冰箱里
25． 或繼續(xù)進行后續(xù)操作，例如電泳，質(zhì)譜等
注意事項
1． 本產(chǎn)品為20次操作
2． 操作時，須戴手套
3． 試劑具有腐蝕性和揮發(fā)性，注意操作安全和密閉瓶蓋
4． 推薦使用系列核糖體分離試劑盒提取核糖體
5． 本公司提供系列核糖體試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標準
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定無蛋白酶污染
3． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定蛋白萃取產(chǎn)量高
4． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定純化程度高
