影響ELISA試劑盒實驗的因素
選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
標(biāo)本收集與保存：
避免使用肉眼可見的溶血標(biāo)本、高脂標(biāo)本和混濁標(biāo)本；
2-8℃下，標(biāo)本可放置24-48小時，長期保存需放置-20℃下。
請避免反復(fù)凍融。
試劑使用中的準備工作及注意事項：
試劑盒中會有提示，一般需要準備的有：
洗滌液；用前配制；有的試劑盒會標(biāo)明，配好的4度下一般可以放一個月；如果沒有標(biāo)明，盡量用新鮮的，不要多配制。
顯色液（有A液和B液的），用前15分鐘配制；
標(biāo)準品：有的試劑盒中標(biāo)準品是已經(jīng)配制好的，4度保存；有的是要現(xiàn)配制的；按照說明書操作；
濃縮*結(jié)合的二抗和HRP：如果需要配制，試劑盒沒注明配好可以保存多久的話，盡量現(xiàn)配現(xiàn)用（用前15分鐘配制）；
熟悉加樣器的使用，在進行實驗之前用水來練習(xí)加樣的快速和準確；
試驗前標(biāo)本需緩慢升溫至室溫，若標(biāo)本為血清，凍結(jié)血清融解後，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡?；鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清後再檢測；
加樣時應(yīng)將所加物加在ELISA 板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出；
加樣後及時放入孵箱；
加酶試劑後用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干；
如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他後處理儀器加酶試劑；
標(biāo)本較多時，請分批操作。每次加樣在兩到三分鐘內(nèi)完成。加標(biāo)本時三排一加。每次加完樣進行計時；
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
請每次測定的同時做標(biāo)準曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
底物請避光保存。
嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準.
所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
本試劑不同批號組分不得混用。
溫 育：
不好的操作原因：
溫育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*；
溫育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。
解決辦法：
貼封片或加蓋：為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜復(fù)蓋板孔，反應(yīng)板不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡。
按說明步驟嚴格控制操作時間。
建議采用空氣浴進行溫育。
參考ELISA實驗操作中的溫育（incubation）
洗 板：
結(jié)果不好的可能原因
采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。
反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。
在間接法中如本底較高。
在ELISA 操作中，洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù)，操作時尤為注意：
保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板後在吸水紙或毛巾（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干（若使用易掉渣的紙，紙屑會留在板孔中，由于紙屑中含有氧化劑而造成高值陰性。）；
嚴謹?shù)脑O(shè)計，的試劑，正確的操作和良好的儀器是保證ELISA必要條件。在實際操作中必須嚴格遵照規(guī)定操作，以嚴謹?shù)淖黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本，才能保證試驗效果。
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