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植物基因組DNA的RFLP

時(shí)間：2013-6-6閱讀：349
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植物基因組DNA的RFLP
實(shí)驗(yàn)原理
DNA多態(tài)性是指DNA堿基順序的差異性。這種差異性不僅存在于不同的植物之間，也存在于同一種植物的不同個(gè)體之間。RFLP多態(tài)性是指DNA限制性?xún)?nèi)切酶酶切片段長(zhǎng)度的多態(tài)性（restniction fragment length olymophorphism）。由于堿基順序的差異，在不同的種或同一個(gè)種的不同個(gè)體之間，它們的基因組DNA限制性?xún)?nèi)切酶位點(diǎn)的種類(lèi)和數(shù)目不同，經(jīng)特定的限制性?xún)?nèi)切酶切割后，所產(chǎn)生的限制性酶切片段在大?。ㄩL(zhǎng)度）和數(shù)目方面自然也存在著差異。通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳分離和溴化乙錠染色，在紫外檢測(cè)儀下觀察，即可直接看到這種差異。電泳分離后，通過(guò)Southern雜交也可顯示出已知DNA的差異。
實(shí)驗(yàn)試劑
1. 限制性?xún)?nèi)切酶
2. 10×限制性?xún)?nèi)切酶緩沖液
3. 0.5M EDTA（pH 8.0）
4. 溴化乙錠
5. 瓊脂糖
實(shí)驗(yàn)設(shè)備
1. 電泳儀和電泳槽
2. 微量離心管
3. 低溫冰箱
4. 37℃水浴鍋
實(shí)驗(yàn)材料
從不同植物或同一植物不同個(gè)體分離出的基因組DNA。
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 限制性?xún)?nèi)切酶酶切
   1） 將在-20℃冷凍的DNA在冰上融化。
   2） 取8支微量離心管按下表所示作好標(biāo)記，并依次加入所需成分。

 
品種I
品種II
品種I－1
品種II－2
單酶切 1#
雙酶切 2#
單酶切 3#
雙酶切 4#
單酶切 5#
雙酶切 6#
單酶切 7#
雙酶切 8#
DNA
10
10
10
10
10
10
10
10
10×緩沖液
2
2
2
2
2
2
2
2
Eco R I
 
1
1
1
1
1
1
1
Hind III
 
1
 
1
 
1
 
1
無(wú)菌水
7
6
7
6
7
6
7
6
總體積（ul）
20
20
20
20
20
20
20
20

   3） 混勻，慢速離心2秒，使溶液全部聚于管底。
   4） 37℃保溫2－3小時(shí)。
   5） 加入1／10體積的0.5M EDTA溶液終止反應(yīng)。
2. 瓊脂糖凝膠電泳分析
 

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