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植物基因組DNA的RFLP

時間:2013-6-6閱讀:347
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植物基因組DNA的RFLP
實驗原理
DNA多態(tài)性是指DNA堿基順序的差異性。這種差異性不僅存在于不同的植物之間,也存在于同一種植物的不同個體之間。RFLP多態(tài)性是指DNA限制性內(nèi)切酶酶切片段長度的多態(tài)性(restniction fragment length olymophorphism)。由于堿基順序的差異,在不同的種或同一個種的不同個體之間,它們的基因組DNA限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)的種類和數(shù)目不同,經(jīng)特定的限制性內(nèi)切酶切割后,所產(chǎn)生的限制性酶切片段在大?。ㄩL度)和數(shù)目方面自然也存在著差異。通過瓊脂糖凝膠電泳分離和溴化乙錠染色,在紫外檢測儀下觀察,即可直接看到這種差異。電泳分離后,通過Southern雜交也可顯示出已知DNA的差異。
實驗試劑
1. 限制性內(nèi)切酶
2. 10×限制性內(nèi)切酶緩沖液
3. 0.5M EDTA(pH 8.0)
4. 溴化乙錠
5. 瓊脂糖
實驗設(shè)備
1. 電泳儀和電泳槽
2. 微量離心管
3. 低溫冰箱
4. 37℃水浴鍋
實驗材料
從不同植物或同一植物不同個體分離出的基因組DNA。
實驗步驟
1. 限制性內(nèi)切酶酶切
   1) 將在-20℃冷凍的DNA在冰上融化。
   2) 取8支微量離心管按下表所示作好標(biāo)記,并依次加入所需成分。

 
品種I
品種II
品種I-1
品種II-2
單酶切 1#
雙酶切 2#
單酶切 3#
雙酶切 4#
單酶切 5#
雙酶切 6#
單酶切 7#
雙酶切 8#
DNA
10
10
10
10
10
10
10
10
10×緩沖液
2
2
2
2
2
2
2
2
Eco R I
 
1
1
1
1
1
1
1
Hind III
 
1
 
1
 
1
 
1
無菌水
7
6
7
6
7
6
7
6
總體積(ul)
20
20
20
20
20
20
20
20

   3) 混勻,慢速離心2秒,使溶液全部聚于管底。
   4) 37℃保溫2-3小時。
   5) 加入1/10體積的0.5M EDTA溶液終止反應(yīng)。
2. 瓊脂糖凝膠電泳分析
 

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